检测残留齐帕特罗的酶联免疫试剂盒及其使用方法

摘要

本发明公开了检测残留齐帕特罗的酶联免疫试剂盒及其使用方法，属于酶联免疫吸附分析方法技术领域。所述试剂盒包括：包被齐帕特罗抗原的酶标板、齐帕特罗标准品工作液、齐帕特罗抗体工作液、齐帕特罗酶标二抗工作液、底物液、终止液、浓缩洗涤液和浓缩样品稀释液。本发明的试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)方法，标准品或待测样本残留的齐帕特罗和酶标板上预包被的抗原共同竞争齐帕特罗抗体。该方法可以用于直接检测动物源性食品、尿样、动物组织和血清样品中的齐帕特罗，具有方便、快速、灵敏等特点，适用于大批量样品检测，本试剂盒灵敏度0.1ng/mL。

主权项

一种检测残留齐帕特罗的酶联免疫试剂盒，其特征在于包括酶标板96孔、齐帕特罗标准品工作液、齐帕特罗抗体工作液、齐帕特罗酶标二抗工作液、底物液、终止液、浓缩洗涤液和浓缩样品稀释液；其中，所述酶标板是包被齐帕特罗抗原的酶标板，齐帕特罗抗原是用0.05 mol/L  pH 9.6的碳酸盐包被缓冲液稀释成1:8000比例，100 µL/孔，37℃，2h，取出4℃放置过夜；取出酶标板甩掉板内液体，用稀释后的浓缩洗涤液300 µL/孔，洗板3次，1min/次；然后加入0.5% BSA封闭，150 µL/孔，37℃放置2h；取出酶标板甩掉板内液体，用洁净的毛巾包裹后拍干板内残留液体；将拍干后的酶标板整齐地摆放置GMP车间恒温25℃晾干；抽检要求板内孔与孔之间，板间的OD值变异系数均小于10%；检验合格后将酶标板密封后置4℃下保存；其中，所述齐帕特罗标准品的浓度分别为0 ng/mL、0.1 ng/mL、0.3 ng/mL、0.9 ng/mL、2.7 ng/mL、8.1 ng/mL；其中，所述齐帕特罗抗体工作液是用抗体稀释液稀释成1:10000比例；所述齐帕特罗酶标二抗工作液是用酶标二抗稀释液稀释成1:2000比例；所述底物液包含0.05 mol/L的NaHPO₄·12H₂O、0.025 mol/L的一水柠檬酸(C₆H₈O₇·H₂O)、0.2 mmol/L的3,3,5,5‑四甲基联苯胺‑、0.5 mmol/L的过氧化氢脲和5%的N,N‑二甲基甲酰胺；所述终止液是2 mol/L的硫酸(H₂SO₄)；所述浓缩洗涤液是20倍浓缩洗涤液，其包含0.05%吐温‑20，0.01 mol/L的PBST，pH值范围7.0‑7.5之间；所述浓缩样品稀释液是2倍浓缩稀释液，其成分为0.01 mol/L，pH7.4磷酸盐PBS缓冲液。