主权项 |
用于检测生物样品中的微生物的PCR即用组合物,其包含组分:以约0.05U至约1 U的量存在的热稳定聚合酶;包含以约0.1 mM至约1 mM的浓度共同存在于所述组合物中的约等量的dATP、dCTP、dGTP 和dTTP的脱氧核苷酸三磷酸的混合物;以约0.01 mM至约1 mM的浓度存在于所述组合物中的选自乙二醇四乙酸、羟乙基乙二胺三乙酸、二亚乙基三胺五乙酸、<i>N,N</i>‑双(羧基甲基)甘氨酸、乙二胺四乙酸、无水柠檬酸盐、柠檬酸钠、柠檬酸钙、柠檬酸铵、柠檬酸氢铵、柠檬酸、柠檬酸二铵、柠檬酸钾、柠檬酸镁、柠檬酸铁铵、柠檬酸锂、和它们的任何组合的螯合剂;以约1 mM至约1 M的浓度存在于所述组合物中的选自N,N,N‑三甲基甘氨酸(甜菜碱)、二甲亚砜(DMSO)、甲酰胺、甘油、非离子型去污剂、聚乙二醇、四甲基氯化铵和它们的任何组合的PCR摩尔渗透压浓度试剂;以约5 ng/ml至约100 ng/ml的浓度存在于所述组合物中的选自牛血清白蛋白、人血清白蛋白、山羊血清白蛋白、哺乳动物白蛋白、和它们的任何组合的白蛋白;以约50 mM至约1 M的浓度共同存在于所述组合物中的至少两种盐,第一种是选自氯化钾和谷氨酸钾的钾盐,且第二种是选自氯化镁和硫酸镁的镁盐;和以约1 mM至约1 M的浓度存在于所述组合物中的选自三(羟基甲基)氨基甲烷(Tris)、柠檬酸盐、2‑(N‑吗啉代)乙磺酸(MES)、<i>N,N</i>‑双(2‑羟基乙基)‑2‑氨基乙磺酸(BES)、1,3‑双(三(羟基甲基)甲基氨基)丙烷(Bis‑Tris)、4‑(2‑羟基乙基)‑1‑哌嗪乙磺酸(HEPES)、3‑(<i>N</i>‑吗啉代)丙磺酸(MOPS)、<i>N,N</i>‑双(2‑羟基乙基)甘氨酸(Bicine)、<i>N</i>‑[三(羟基甲基)甲基]甘氨酸(Tricine)、<i>N</i>‑2‑乙酰胺基‑2‑亚氨基二乙酸(ADA)、<i>N</i>‑(2‑乙酰胺基)‑2‑氨基乙磺酸(ACES)、哌嗪‑1,4‑双(2‑乙磺酸)(PIPES)、碳酸氢盐、磷酸盐和它们的任何组合的缓冲剂,pH为约6.5至约9.0,其中所述缓冲剂的pKa 在选择的温度下的pH 的约一个单位之内,其中所述组分与不含核酸酶的水相组合。 |