鼠灰链霉菌AMP脱氨酶基因的毕赤酵母真核表达方法

摘要

本发明公开一种鼠灰链霉菌AMP脱氨酶基因的毕赤酵母真核表达方法。该方法以鼠灰链霉菌基因组为模板，设计特异性引物扩增AMP脱氨酶基因序列，在其两端加入酶切位点和组氨酸标签，并亚克隆至组成型表达载体pGAP9K以构建重组质粒，酶切线性化后电转化毕赤酵母，筛选阳性克隆转化子，接种至发酵培养基进行液体发酵培养，取发酵液上清，即得AMP脱氨酶表达产物。本发明首次在毕赤酵母中成功表达了鼠灰链霉菌来源的AMP脱氨酶，实验结显示该重组酶具有较高的酶活，且酶活性稳定，易于纯化，可应用于食品、医药等领域，为AMP脱氨酶的工业化生产奠定了基础。

主权项

鼠灰链霉菌AMP脱氨酶基因的毕赤酵母真核表达方法，其特征在于：以鼠灰链霉菌基因组为模板，设计特异性引物扩增AMP脱氨酶基因序列，在其两端加入酶切位点和组氨酸标签，并亚克隆至组成型表达载体pGAP9K以构建重组质粒，酶切线性化后电转化毕赤酵母，筛选阳性克隆转化子，接种至发酵培养基进行液体发酵培养，取发酵液上清，即得AMP脱氨酶表达产物。