叶螨属常见种的PCR-RFLP鉴定方法

摘要

本发明公开了叶螨属常见种的PCR-RFLP鉴定方法。该方法通过DNA提取，多聚酶链式反应（PCR）扩增出核糖体转录间隔区序列片段（ITS）后经过四种限制性内切酶酶切得到种特异性的限制性片段长度多态性图谱（RFLP），最后对照标准图谱对叶螨属常见种实现快速准确鉴定。本发明所述叶螨属常见种的快速鉴定方法迅速、简单、可靠，还可用于叶螨批量鉴定。此分子鉴定技术为叶螨属科研、检疫和田间防治准确鉴定种提供了保障。

主权项

一种中国叶螨属常见种的PCR‑RFLP鉴定方法，其特征在于包含以下步骤：1）提取待鉴定叶螨总DNA；2）使用叶螨中扩增ITS的通用引物PCR扩增ITS序列；3）将上述PCR产物作为酶切模板,分别使用Rsa I、Mbo II、HpyF3I、Hinf I4种酶进行酶切反应，取酶切产物，进行琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统下观察并拍照记录结果；4）将待鉴定图谱与标准酶切图谱比对，通过比较酶切条带的数量与位置从而确定待鉴定叶螨的物种。