一种新型特异性抗原负载诱导CTL的活化B细胞模型

摘要

本发明涉及一种新型特异性抗原负载诱导CTL的活化B细胞模型。本发明分离人外周血，得人外周血单个核细胞，CD20磁珠分离其中的B细胞，将其在孵育箱内培养，去除B细胞的PBMC，B细胞培养后进行HBcAg18-27多肽负载，加入多肽量为50ug／ml，负载时间为12～18小时，抗原负载后洗涤B细胞，去除B细胞的PBMC细胞内，B细胞与T细胞比例为1：10，继续培养4天后取出所培养细胞，五聚体技术检测HBV HBcAg18-27多肽特异性CTL细胞。本发明解决了占外周血单个核细胞的比例在1％以下、扩增的效率不高，且培养时间长并且培养的费用高昂等缺陷。本发明建立了一种可靠和简单的细胞实验模型，避免了树突状细胞需要长时间培养并培养扩增效率低下的缺陷。

主权项

一种新型特异性抗原负载诱导CTL的活化B细胞模型，其步骤为：(1)无菌收集人外周血；(2)淋巴细胞分离液分离人外周血，得人外周血单个核细胞；(3)CD20磁珠分离外周血单个核细胞中的B细胞；(4)将人B细胞置于由含10％人AB血清、5ug／ml胰岛素，50ug／ml转铁蛋白、2ug／ml的sCD40L、2ng／ml的IL‑4组成的培养液中重悬细胞，细胞浓度1×10⁶／ml，放入5％CO₂、37℃、饱和湿度的孵育箱内培养；(5)去除B细胞的PBMC，用含10％胎牛血清，IL‑250IU／ml，CD3Ab3.03ng／ml的1640培养液培养，细胞浓度1×10⁶／ml，在25ml培养瓶内培养；(6)B细胞培养至第4‑8天进行HBcAg18‑27多肽负载，加入多肽量为50ug／ml，负载时间为12～18小时，抗原负载后洗涤B细胞，加入到步骤(5)的培养去除B细胞的PBMC细胞内，B细胞与T细胞比例为1：10；(7)继续培养4天后取出所培养细胞，五聚体技术检测HBV HBcAg18‑27多肽特异性CTL细胞。