香蕉枯萎病菌和细菌性软腐病菌的多重分子快速检测方法

摘要

本发明公开一种香蕉枯萎病菌和细菌性软腐病菌的多重分子快速检测方法。本发明提供一组特异引物，可在一次PCR扩增反应内同时检测香蕉枯萎病菌1号、4号生理小种，以及细菌性软腐病菌；当PCR产物呈现636bp条带，即样本中含有FOC1；呈现796bp条带，即样本中含有FOC4；呈现218bp条带，即样本中含有细菌性软腐病原菌。该方法操作简单，耗时短，检测灵敏度高；检测香蕉枯萎病菌菌丝的灵敏度可达1μg，检测细菌性软腐病菌的灵敏度可达10³CFU/ml。该方法同时可应用于香蕉患病组织、直接分离的病原菌或土壤的检测，具有准确度高等优点，防止香蕉枯萎病和细菌性软腐病的扩散与蔓延，保障香蕉安全生产。

主权项

一种香蕉枯萎病菌和细菌性软腐病菌的多重分子快速检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）提供两对检测引物，如下所示：香蕉枯萎病菌上游特异引物Foc‑F：5'‑TTCGGCGATAACTTCAATGTCA‑3'；香蕉枯萎病菌下游特异引物Foc‑R：5'‑TGGGTTGCGGATTCGCTATT‑3'；细菌性软腐病菌上游特异引物GyrB‑F：5'‑AATACGACATTCTGGCTAAGCG‑3'；细菌性软腐病菌下游特异引物GyrB‑R：5'‑GATTTCCACGCCGATATTGTCT‑3'；（2）对样本进行处理，抽提样本DNA；（3）以样本DNA为模板，使用香蕉枯萎病菌上游、下游特异引物和细菌性软腐病菌上游、下游特异引物进行多重PCR扩增反应；（4）将扩增产物用琼脂糖凝胶电泳检测；当PCR产物呈现636bp条带时，即样本中含有香蕉枯萎病菌1号生理小种病原菌；当PCR产物呈现796bp条带时，即样本中含有香蕉枯萎病菌4号生理小种病原菌；当PCR产物呈现218bp条带时，即样本中含有细菌性软腐病原菌。