食品和饮料中胡萝卜成分快速检测试剂盒的制备和检测方法

摘要

本发明属于食品和饮料中植物源性成分的定性检测技术，具体地说是用实时荧光PCR技术检测食品和饮料中胡萝卜成分的试剂盒及方法。试剂盒包括PCR扩增反应液A、UNG酶B、Taq酶C；PCR扩增反应液A含有10×PCR反应缓冲液、硫酸镁、dNTP(含dUTP)、上游引物5′-CGACAAGCAAGCTTTACTCCAA-3′、下游引物5′-CGTCTGACACCCATGAGTCTGT -3′、TaqMan探针5′-FAM-TCAAAACAGCCTTGAAAAACCCCACCA-TRAMA-3′；胡萝卜成分的快速检测方法包括食品和饮料DNA的提取、胡萝卜成分的实时荧光PCR扩增和结果判定。其优点是快速、特异性强、灵敏度高、操作简便、重复性好。

主权项

一种胡萝卜成分快速检测试剂盒，其特征在于其中的试剂包括(1)‑(3)：(1)PCR扩增反应液A包括10×PCR反应缓冲液、0.1‑0.4mmol／L dNTP、2‑4mmol／L硫酸镁、0.2‑0.6μmol／L上游引物、0.2‑0.6μmol／L下游引物、0.2‑0.6μmol／L TaqMan探针；其中10×PCR反应缓冲液含有100mmol／L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷‑盐酸、500mmol／L氯化钾和1％曲拉通X‑100；其中dNTP内的四种脱氧核糖核酸的质量比为dUTP∶dATP∶dGTP∶dCTP=2∶1∶1∶1；其中上游引物序列为：5′‑CGACAAGCAAGCTTTACTCCAA‑3′、下游引物序列为：5′‑CGTCTGACACCCATGAGTCTGT‑3′；其中TaqMan探针序列为：5′‑TCAAAACAGCCTTGAAAAACCCCACCA‑3′，其5′端标记FAM报告荧光集团，3′端标记TAMRA淬灭荧光集团；其中上游引物、下游引物、TaqMan探针的体积比为：1∶1∶1；(2)UNG酶：1U／μL；(3)Taq酶：5U／μL。