鸡新城疫诊断用抗原制备方法

摘要

本发明涉及鸡新城疫诊断抗原制备工艺流程，对如下环节进行详细的说明与阐述，包括制备抗原用种毒的筛选、优化，培养病毒用种胚选择，孵化要求、收获培养物，甲醛灭活工艺，浓缩过程等等。采用该优化工艺制备的鸡新城疫诊断抗原具有效价稳定、保存时间长、测定抗体滴度准确等特点。

主权项

一种鸡新城疫诊断用抗原制备方法，其特征在于：（1）病毒种毒 该抗原是用鸡毒株为新城疫病毒La Sota‑C8株作为抗原生产毒株的，该病毒已于2011年12月13日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No.5576；（2）种蛋 选用美国Merial公司9～10日龄的SPF鸡胚进行培养，要求种蛋大小均匀、表面清洁、受精率高、孵化率高、纯净无任何外源病毒或细菌污染；（3）孵化 先对孵化器进行甲醛熏蒸消毒，温度：在37.5℃～38℃之间；湿度，立体孵化器的最适宜孵化湿度75%；通风换气：随着鸡胚的发育，产生的热量增多，同时对氧气的需要量也逐渐增大，要保持孵化器内空气新鲜，风扇转速为60～180r/min；（4）收获 接种种毒后的鸡胚，后孵化要求温度36.5℃、湿度55%～60%，培养96～120小时；逐个无菌收获鸡胚尿囊液，混合均匀后成为制备抗原的病毒液；（5）灭活 按病毒液体积的1‰体积（V/V）加入福尔马林溶液，置于100～120r/min摇床上摇晃，于2℃～8℃灭活间48小时；（6）浓缩工艺 采用美国Millipore高密度浓缩机对抗原用病毒液进行浓缩，去除大分子杂蛋白、尿酸盐等外源杂质干扰，提高病毒液的纯度和效价；（7）抗原效价 抗原的病毒HA价达到2¹¹；病毒EID₅₀达10^9.3～10^9.7/0.1ml。