发明名称 |
肺炎衣原体热休克蛋白60的可溶性蛋白的制备方法及使用方法 |
摘要 |
本发明公开了肺炎衣原体热休克蛋白60的可溶性蛋白的制备方法及使用方法。本发明从肺炎衣原体CpnAR39株基因中获取cHSP60的序列,设计引物序列;用RT-PCR法扩增cHSP60的cDNA,并将cHSP60与原核表达载体pET28a连接,构建pET28a-cHSP60重组质粒;经过克隆、酶切鉴定及核苷酸测序证实,获得重组的表达载体pET28a-cHSP60,经过IPTG的诱导在E.coliBL21菌株中产生cHSP60-His融合蛋白,获得的cHSP60-His融合蛋白进行体内外实验。得到的cHSP60融合蛋白有生物活性,可进行与衣原体相关感染的研究,不局限于以病人进行研究。 |
申请公布号 |
CN103789336A |
申请公布日期 |
2014.05.14 |
申请号 |
CN201410056510.0 |
申请日期 |
2014.02.19 |
申请人 |
杭州师范大学 |
发明人 |
史丽云;康艳华;卢哲 |
分类号 |
C12N15/70(2006.01)I;C07K19/00(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I;C12Q1/02(2006.01)I;G01N33/68(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/70(2006.01)I |
代理机构 |
杭州求是专利事务所有限公司 33200 |
代理人 |
杜军 |
主权项 |
一种肺炎衣原体热休克蛋白60的可溶性蛋白的制备方法,肺炎衣原体热休克蛋白60即cHSP60,该方法构建cHSP60的原核表达系统pET28a‑cHSP60,制备cHSP60‑组氨酸融合蛋白,SEQ ID NO:1,显示cHSP60‑组氨酸融合蛋白的核苷酸序列;其特征在于:所述肺炎衣原体热休克蛋白60的可溶性蛋白的制备方法包括以下步骤:步骤(1)从肺炎衣原体Cpn AR39株基因中获取cHSP60的序列,设计引物序列;引物序列:上游引物,5’‑CCGCATATGGTCGCTAAAAACAT‑3’;下游引物,5’‑CCAGCTCGAGTTAATAGTCCATTCCTGCGC‑3’;步骤(2)用RT‑PCR法扩增cHSP60的cDNA,并将cHSP60与原核表达载体pET28a‑c(+)连接,构建pET28a‑cHSP60重组质粒;RT‑PCR法扩增体系为:模板cDNA为2.5μl,5’引物与3’引物各加0.4μl,2xTaq Plus PCR MasterMix为10μl,最后加双蒸水补足到20μl;反应条件为:95℃预变性5分钟;95℃变性30秒,58℃退火30秒,72℃延伸90秒,进行30个循环;72℃延伸5分钟;步骤(3)经过克隆、酶切鉴定及核苷酸测序证实,获得重组的表达载体pET28a‑cHSP60,经过IPTG的诱导在E.coli BL21菌株中产生cHSP60‑His融合蛋白。 |
地址 |
310036 浙江省杭州市下沙高教园区学林街16号 |