K5肝素前体的发酵和纯化

摘要

一种适于工业生产的、从大肠杆菌K5的发酵培养物生产肝素前体的方法，所述方法表现出较高的产量和纯度、较小的培养物体积、较快的生长和较低的成本。

主权项

一种由大肠杆菌K5生产基本上纯的肝素前体的方法，所述方法包括：（a）在具有作为初级碳源的葡萄糖的限定培养基中培养大肠杆菌K5；（b）将肝素前体与固相结合，并随后进行洗脱；以及（c）从洗出液中沉淀肝素前体；其中，所述基本上纯的肝素前体的纯度为至少90%，其中，所述培养由分批生长阶段和补料分批生长阶段构成；其中：（i）在分批生长阶段使用的培养基包含：每升约20g葡萄糖、10mg至300mg硫胺、约13.5g KH₂PO₄、约4.0g(NH₄)₂HPO₄、约1.4g MgSO₄·7H₂O、约1.7g柠檬酸以及约10.0mL微量金属溶液，其中，所述微量金属溶液基本上由每升5M HCl10.0g FeSO₄·7H₂O、2.0gCaCl₂、2.2g ZnSO₄·7H₂O、0.5g MnSO₄·4H₂O、1.0g CuSO₄·5H₂O、0.1g(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O和0.02g Na₂B₄O₇·10H₂O构成，（ii）在补料分批生长阶段使用的饲养培养基由每升250g至1000g葡萄糖、20g MgSO₄、0.15g至0.5g硫胺和任选地47g KH₂PO₄构成，以及（iii）氧通过喷入的空气提供，所述喷入的空气带有或不带有补充的氧。