发明名称 |
一种检测黄牛Pax3基因单核苷酸多态性的PCR-RFLP方法与应用 |
摘要 |
本发明公开了一种快速检测黄牛Pax3基因单核苷酸多态性的PCR-RFLP方法。首先,根据DNA池测序结果,检测到的基因多态性包括:在黄牛的Pax3基因序列转录起始位点-580位T或G的单核苷酸多态性;在Taq DNA聚合酶、Buffer(缓冲环境)、Mg<sup>++</sup>、dNTPs存在的情况下,PCR扩增黄牛Pax3基因,分别用HinfI和HaeIII限制性内切酶消化PCR扩增产物之后,再对酶切后的片段进行琼脂糖凝胶电泳分型。本发明提供的检测方法为Pax3基因的SNP与生长性状关系的建立奠定了基础,以便用于黄牛生长性状的标记辅助选择,从而快速高效、精确地培育优质、特色的肉牛新品系。 |
申请公布号 |
CN103789406A |
申请公布日期 |
2014.05.14 |
申请号 |
CN201310465936.7 |
申请日期 |
2013.09.29 |
申请人 |
西北农林科技大学 |
发明人 |
陈宏;徐瑶;石涛;周扬;蔡含芳;蓝贤勇 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
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代理人 |
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主权项 |
一种检测黄牛Pax3基因的单核苷酸多态性的PCR‑RFLP方法,其特征在于,以中国地方黄牛基因组DNA序列为模板,在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg<sup>++</sup>、dNTPs存在的情况下,利用聚合酶链式反应引物P<sub>1</sub>和P<sub>2</sub>,进行PCR扩增,然后利用限制性内切酶对其进行酶切,再通过电泳检测即可准确鉴定黄牛单核苷酸多态性。所述的聚合酶链式反应引物P<sub>1</sub>为:上游引物P<sub>1</sub>‑F:5’‑CCCTTCTTTCCCCAGGTTAGAGAC‑3’24nt下游引物P<sub>1</sub>‑R:5’‑GGGCTCGGGAGCATTTATT‑3’ 19nt用限制性内切酶HinfI消化PCR扩增产物之后,再对酶切后的片段进行琼脂糖凝胶电泳,根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定黄牛的Pax3基因第‑580位的碱基多态性;所述的聚合酶链式反应引物P<sub>2</sub>为:上游引物P<sub>2</sub>‑F:5’‑GCGAAGAGGAGGAGACCGA‑3’ 19nt下游引物P<sub>2</sub>‑R:5’‑AGATTCCGAGGGACTGTGAG‑3’ 20nt用限制性内切酶HaeIII消化PCR扩增产物之后,再对酶切后的片段进行琼脂糖凝胶电泳,根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定黄牛的Pax3基因第4617位的碱基多态性。 |
地址 |
712100 陕西省咸阳市杨凌区邰城路3号 |