一种快速单核苷酸多态性的检测方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种单核苷酸多态性(SNPs)检测方法，具体讲，涉及一种采用在同一反应体系中一步PCR反应和核酸检测试纸条对特异性扩增产物进行检测的方法；首先通过第一种PCR温度循环非特异性扩增含有SNPs位点的片段，然后通过AS-PCR特异性扩增含有单核酸多态性位点的碱基，最后通过核酸检测试纸条对特异性扩增产物进行检测。本方法也可用于检测单核苷酸突变。本方法敏感度高、特异性强、操作简单、时间短，成本低，使得检测结果更加快速、可靠，具有蛋白质与核酸诊断试剂各自的优点。本发明还涉及本试剂盒在病原体已知耐药基因的检测、器官移植中供体和受体间的配对选择、法医研究中罪犯身份的鉴别或亲子鉴定中的应用。

主权项

一种快速检测单核苷酸多态性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒采用在同一反应体系中两种PCR反应和核酸检测试纸条对特异性扩增产物进行检测的方法；首先通过第一种PCR温度循环非特异性扩增含有SNPs位点的片段，然后通过AS‑PCR特异性扩增含有单核酸多态性位点的碱基，最后通过核酸检测试纸条对特异性扩增产物进行检测；所述的试剂盒中包括以下引物和探针：扩增包含SNPs位点的模板序列的不带任何标记的引物对A，非特异性扩增靶模板以增加靶模板数量；针对SNPs位点上的不同碱基类型进行特异性扩增的特异性引物B，当引物B与模板序列完全互补时，引物B才能延伸；与引物B延伸产物进行特异性杂交的探针C，从而完成对SNPs位点碱基类型的检测；所述特异性引物B上标记有抗原或半抗原，所述抗原或半抗原选自生物素、地高辛或荧光染料，所述荧光染料选自Cy3、Cy5、四甲基罗丹明（Tetramethylrhodamine）、AlexaFluor荧光染料、罗丹明（Rhodamine）、Fam或FitC；所述探针C上标记有抗原或半抗原，所述抗原或半抗原选自生物素、地高辛或荧光染料，所述荧光染料选自Cy3、Cy5、四甲基罗丹明（Tetramethylrhodamine）、AlexaFluor荧光染料、罗丹明（Rhodamine）、Fam或FitC；所述的试纸条包括在带有不干胶的衬垫上按顺序有样品垫、有色颗粒结合物垫和吸水滤纸垫，上述各部分在相邻处部分重叠，纤维膜上还设有检测线和质控线，其中有色颗粒结合物垫上的有色颗粒有抗A抗体包被，检测线上有抗B抗体包被，质控线上有抗A抗体，有色颗粒选自胶体金颗粒、乳胶颗粒；所述核酸检测试纸条上设置有与引物B或探针C杂交产物所标记的抗原或半抗原特异性结合的抗体形成的检测线。