促进β-β交联的制备含热稳定的氧载体的组合物的方法

摘要

本发明提供有利于β-β交联的制备含热稳定的基于血红蛋白的氧载体的药物组合物的方法。使用本发明的方法，可控制得到的分子的氧亲和力，从而使得可产生经调整用于特定应用的基于血红蛋白的氧载体。较低氧亲和力的交联血红蛋白可用于需要快速组织氧合的应用(例如出血性休克)，而较高氧亲和力的交联血红蛋白可用于需要较慢氧合速率的应用(例如癌症辅助疗法)。产生了高度纯化的和热稳定的交联非聚合的四聚血红蛋白，所述四聚血红蛋白具有大于40-60％的β-β交联并且适用于哺乳动物而不会引起肾损伤和血管收缩。进行高温和短时间(HTST)热加工步骤以有效地去除任何不需要的二聚血红蛋白、未交联的四聚血红蛋白和血浆蛋白质杂质。

主权项

一种制备含高度纯化的和热稳定的氧载体的药物组合物的方法，该含氧载体的药物组合物包含血红蛋白，所述血红蛋白基本上由具有高于40％的β‑β交联的非聚合的交联四聚血红蛋白组成，所述方法包括：a)提供至少包含红细胞和血浆的哺乳动物全血；b)将所述哺乳动物全血中的所述红细胞与所述血浆分离；c)过滤与所述血浆分离的所述红细胞以获得滤过的红细胞级分；d)洗涤所述滤过的红细胞级分以去除血浆蛋白质杂质，得到洗涤过的红细胞；e)破裂所述洗涤过的红细胞以产生包含破裂的红细胞的裂解产物的溶液；f)进行过滤以从所述裂解产物中去除至少一部分废滞留物；g)从所述裂解产物中提取第一血红蛋白溶液；h)进行至少一个纯化过程以去除病毒、废滞留物或蛋白质杂质中的一种或多种；i)在氧合环境中通过富马酸双‑3，5‑二溴水杨酸酯使所述第一血红蛋白溶液交联以形成交联血红蛋白，其中所述交联血红蛋白是具有至少40％β‑β交联的非聚合的交联四聚血红蛋白；j)去除任何残留的化学品；k)在脱氧环境中热处理所述交联血红蛋白以使任何残留的未稳定化的/未交联的血红蛋白、任何二聚血红蛋白和任何其它蛋白质杂质变性并沉淀，从而使得得到的热稳定的交联四聚血红蛋白具有检测不到浓度的二聚体并且基本上由非聚合的交联四聚血红蛋白组成，所述非聚合的交联四聚血红蛋白具有至少40％的β‑β交联且其氧亲和力大于在基本上类似的条件下测量的相同物种的天然血红蛋白的氧亲和力；l)通过离心或过滤去除沉淀以形成澄清溶液；和m)将纯化的和热稳定的交联四聚血红蛋白添加到药物上可接受的载体。