拟穴青蟹抗菌肽hyastatin基因克隆及编码蛋白重组和用途

摘要

本发明涉及的是拟穴青蟹抗菌肽hyastatin基因克隆及编码蛋白重组和用途。本发明利用构建cDNA文库技术、3'和5'末端快速扩增技术从拟穴青蟹血淋巴文库中克隆到抗菌肽Hyastatin基因全长序列，该基因在拟穴青蟹免疫防御方面发挥着重要作用。本发明利用体外重组表达技术获得了拟穴青蟹抗菌肽Hyastatin基因成熟肽表达蛋白，分子量为29358.0，等电点为5.05，该重组蛋白对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌均有一定的抑制作用。本发明可为拟穴青蟹的病害防治、医药产品开发和饲料添加剂应用奠定基础。

主权项

拟穴青蟹抗菌肽hyastatin基因克隆及编码蛋白重组，其特征在于：所述拟穴青蟹抗菌肽Hyastatin基因，具有序列表SEQ ID NO.1中碱基序列，该基因是从拟穴青蟹血淋巴cDNA文库中筛选到的表达序列标签，该序列全长837 bp，包括396 bp的开放阅读框（ORF），编码131个氨基酸，5'非编码区长105 bp，3'非编码区长336 bp，有多聚腺苷酸加尾信号和多聚腺苷酸尾巴； 所述拟穴青蟹抗菌肽Hyastatin基因编码蛋白，具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，该蛋白分子量为70547.7KDa，等电点为5.04，其中编码序列的106‑153为信号肽序列，成熟肽分子量为29358.0，等电点为5.05，氨基酸具有 Penaeidins家族特有区域：N端为Pro/Arg区，C端含有6个Cys，形成3个分子内二硫键。