发明名称 |
高效分离和培养海马神经元的方法 |
摘要 |
本发明属于细胞生物学领域,涉及一种神经元分离和培养方法及试剂。本发明的目的在于针对现有技术存在的问题,改进当前海马神经元体外分离和培养的方法,解决了海马神经元原代培养的增殖性和活性无法保持的问题。本发明建立了一套比较成熟的体外培养海马神经元的方法,本发明得到的神经细胞数量充足,生长状态较好,能够从哺乳动物的海马组织中分离出高活性、高数量的海马神经细胞,符合原代海马细胞培养的要求,可满足神经科学研究中细胞生物学实验的需求。 |
申请公布号 |
CN103789265A |
申请公布日期 |
2014.05.14 |
申请号 |
CN201410066483.5 |
申请日期 |
2014.02.21 |
申请人 |
刘洛贤 |
发明人 |
刘洛贤 |
分类号 |
C12N5/0793(2010.01)I |
主分类号 |
C12N5/0793(2010.01)I |
代理机构 |
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代理人 |
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主权项 |
一种海马神经元的分离和原代培养方法包括以下步骤: (1)漂洗:取离体哺乳动物的海马组织,置冰浴的漂洗液中,去除红细胞、被膜及结缔组织,用漂洗液冲洗2~5次; (2)消化:将步骤1漂洗后的海马组织剪成直径1mm3小块,用5倍组织体积的消化液37℃作用5~10分钟,组织成粥糜状,用细胞种植液终止消化,轻轻吹打至组织块10次以分散细胞。 (3)制备细胞悬液:收集步骤2消化后初次细胞悬液,经200目细胞筛过滤后,800~1000rpm4℃离心5~10分钟,弃去上清液,加入细胞种植液,重悬细胞,制成5×105~10×10<sup>5</sup>个/mL的单细胞悬液; (4)接种、培养:将步骤3细胞悬液种植于预先铺好多聚赖氨酸的培养皿及培养瓶中,置于37℃、5%CO<sub>2</sub>恒温培养箱中,种植后24~72小时换成细胞维持液,之后每隔两天用细胞维持液换液,每次更换的量为原体积的1/2。 |
地址 |
325000 浙江省温州市鹿城区新田园四组团4栋1402室 |