梯度溶氧发酵提高酿酒酵母超氧化物歧化酶产量的方法

摘要

本发明公开了梯度溶氧发酵提高酿酒酵母超氧化物歧化酶产量的方法，包括如下步骤：1）菌种活化糖液准备；2）发酵基础培养基和补料液准备；3）菌种复水与活化；4）发酵培养和溶氧定向诱导：将复水与活化后的菌液接种于发酵基础培养基发酵，在发酵3小时，开始流加补料液，补料与溶氧量联动；5）超氧化物歧化酶粗酶液提取。本发明的方法定向地诱导细胞生产SOD，使天然酵母SOD产量显著提高，降低生产成本，使SOD产品能够成为普通人群所能接受的健康食品、医药或美容护肤品。为实现酿酒酵母SOD的产业化提供了强有利的技术支持。

主权项

梯度溶氧发酵提高酿酒酵母超氧化物歧化酶产量的方法，其特征包括如下步骤：1）菌种活化糖液准备：将浓度为15‑25g/L葡萄糖水溶液，高压灭菌15‑25min，冷却至室温；2）发酵基础培养基和补料液准备，其中：发酵基础培养基：葡萄糖20‑50g/L，蛋白胨5‑15g/L，酵母膏10‑20g/L，KH₂PO₄0.3‑1.0g/L，CuSO₄·5H₂O0.3‑1.0g/L，ZnSO₄·7H₂O0.3‑1.0g/L，MgSO₄·7H₂O2‑10g/L，余量为水，自然pH，121℃灭菌20‑25min；补料液是20‑50g/L葡萄糖水溶液；3）菌种复水与活化：酿酒高活性干酵母按质量1%接种于所述菌种活化糖液中，置于摇床，于30‑34℃，150‑200rpm，复水与活化1‑2小时；4）发酵培养和溶氧定向诱导：将复水与活化后的菌液按体积30%‑60%接种于发酵基础培养基，在转速300‑700rpm，30‑32℃起始发酵，在发酵3小时，开始流加补料液，补料与溶氧量联动，在发酵3‑40小时，控制溶氧量在10%以下，补料液流加速度相当于每升发酵基础培养基每分钟补葡萄糖0.1‑0.2g；在发酵40.01‑45小时，控制溶氧量在10%‑25%，补料液流加速度相当于每升发酵基础培养基每分钟补葡萄糖0.05‑0.1g；在发酵45.01‑55小时，控制溶氧量在25%‑35%，补料液流加速度相当于每升发酵基础培养基每分钟补葡萄糖0.02‑0.04g；发酵55.01‑65小时，控制溶氧量35%‑45%，补料液流加速度相当于每升发酵基础培养基每分钟补葡萄糖0.004‑0.02g；65.01‑70小时，控制溶氧量在50%以上；5）超氧化物歧化酶粗酶液提取：将步骤4）获得的发酵液以7000‑10000rpm室温离心10‑20分钟，收集细胞；按细胞与水之比为1g:3‑5ml的比例，将细胞重悬于水中，超声破壁；将破壁液在7000‑10000rpm室温离心10‑20分钟，收集上清，得到超氧化物歧化酶粗提液。