一种配合饲料中纤维素酶的检测方法

摘要

本发明提供了一种配合饲料中纤维素酶的检测方法，是通过透析袋透析对配合饲料中纤维素酶进行浓缩从而实现测定的方法。本方法实现了对配合饲料种纤维素酶的准确控制。

主权项

1.一种配合饲料中纤维素酶的检测方法，其特征在于：依次包括如下步骤，准确称取10g饲料试样后，加40mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液；磁力搅拌30min，再用缓冲溶液定容至100mL。3000r/min离心10min，取上清15mL放入透析袋中透析，透析袋放在乙酸-乙酸钠缓冲溶液中，缓冲液每隔8h换一次。4℃条件下避光透析24h后待测，酶活力高于标准曲线范围(0.10mg/mL～0.70mg/mL葡萄糖标准溶液)时可用缓冲液做适当稀释，稀释后的待测酶液中纤维素酶活力控制在0.02U/mL～0.12U/mL之间；吸取2.00mL酶液(37℃平衡10min)，加入到刻度试管中，再加入5mL DNS试剂，电磁振荡3s。加入2mLβ-葡聚糖溶液(37℃平衡20min)，37℃保温30min，沸水浴加热5min。用自来水冷却至室温，加水定容至25mL，电磁振荡3s。以标准空白样为空白对照，在540nm处测定吸光度A_B。吸取2.00mL酶液(37℃平衡10min)到刻度试管中，加入2mLβ-葡聚糖溶液(37℃平衡20min)，电磁振荡3s。37℃精确保温30min(秒表计时)。加入5mL DNS试剂，电磁振荡3s，以终止酶解反应。沸水浴加热5min，用自来水冷却至室温，加水定容至25mL，电磁振荡3s。以标准空白样为空白对照，在540nm处测定吸光度A_E。试样酶活力按式(1)、式(2)计算$X_D=\frac{[(A_E-A_B)\times K+\mathrm{Co}]}{M\times t}\times 1000...\left(1\right)$式中：X_D——试样稀释液的β-葡聚糖酶活力，单位为酶活力单位每毫升(U/mL)；A_E——酶反应液的吸光度；A_B——酶空白样的吸光度；K——标准曲线的斜率；Co——标准曲线的截距；M——葡萄糖的摩尔质量M＝180.2g/mol；t——酶解反应时间，单位为分钟(min)；1000——转化因子，1mmol＝1000μmol；X_D值应在0.02U/mL～0.13U/mL之间；不在范围内时，应重新选择酶液的稀释度，再进行分析测定。X＝X_D×D_f……………………(2)式中：X——试样中β-葡聚糖酶活力，单位为酶活力单位每克(U/g)；D_f——试样的稀释倍数；该检测方法定量限为0.2U/g、精密度小于10％。