PKCα-siRNA质粒载体的构建、筛选方法及应用

摘要

本发明涉及一种PKCα-siRNA质粒载体的构建及其筛选方法，包括以下步骤：1）设计及合成靶向PKCα的siRNA，2）构建PKC-αsiRNA的重组质粒载体，以及PKCα-siRNA质粒载体在卵巢癌耐药方面的应用。本发明的有益效果为：成功建立了几种靶向PKC-α的siRNA重组质粒载体（pEGFP-iLenti-PKC-α），并将pEGFP-iLenti-PKC-α导入人卵巢癌耐药细胞株用于卵巢癌耐药研究，最终筛选出逆转耐药效果最好的pEGFP-iLenti-PKC-α492。这一发明为肿瘤多药耐药的逆转研究提供了一种新方法。

主权项

一种PKCα‑siRNA质粒载体的构建及其筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：1）设计及合成靶向PKCα的siRNA，进一步包括以下步骤：1.1）根据基因库PKCα基因序列筛选出候选序列；1.2）根据RNAi目标序列的选取原则优化siRNA序列；1.3）确定靶向PKC‑α的siRNA的目标序列；2）构建PKC‑α siRNA的重组质粒载体，进一步包括以下步骤：2.1）退火连接单链目的基因片段；2.2）Eco31I酶切质粒pEGFP‑iLenti；2.3）1％琼脂糖凝胶回收酶切线性空载体；2.4）连接线性化质粒载体；2.5）重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞及扩增；2.6）纯化重组质粒。