副溶血性弧菌三重实时荧光PCR检测试剂盒

摘要

本发明提供一种副溶血性弧菌三重实时荧光PCR检测试剂盒，包括三对特异性引物、EvaGreenPCR预混液、阴性对照和阳性对照，特异性引物包括副溶血性弧菌耐热直接溶血素基因（tdh）、耐热相关溶血素基因（trh）和毒素表达调控蛋白基因（toxR）的特异性引物。本发明试剂盒不但具有实时荧光PCR快速、灵敏和自动化程度高的优点，而且基于熔解曲线技术进行三重实时荧光PCR检测，不需要合成昂贵的检测探针，检测成本低，只需最为常规的FAM/SYBR通道即可完成3个靶基因的检测，对实时荧光PCR仪的要求低，几乎适用于所有市售实时荧光PCR仪。所述检测周期短、检测成本低、检测结果可靠。

主权项

一种副溶血性弧菌三重实时荧光PCR检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含三对特异性引物、EvaGreen PCR预混液、阳性对照和阴性对照，其中EvaGreen PCR预混液包括PCR缓冲液、dNTP混合物、DNA聚合酶和饱和荧光染料EvaGreen，阳性对照为tdh、trh双阳性副溶血性弧菌DNA提取液，阴性对照为超纯水，所述三对特异性引物的序列如下：tdh上游引物：5’‑CTTCCATCTGTCCCTTTTCCTGCC‑3’tdh下游引物：5’‑CCTGACGTTGTGAATACTGATTGACCATA‑3’trh上游引物：5’‑TACCTTTTCCTTCTCCAGGTTCGG‑3’trh下游引物：5’‑TCGTTTTATGTTTCGGTTTGTCCAGT‑3’toxR上游引物：5’‑TCTTCTGACGCAATCGTTGAACCA‑3’toxR下游引物：5’‑CTGATACTCACCAATCTGACGGAACTG‑3’ 。