发明名称 |
基于AllGlo探针荧光定量PCR的血浆microRNA检测试剂盒及其检测方法 |
摘要 |
基于AllGlo探针荧光定量PCR的血浆microRNA检测试剂盒及其检测方法,涉及microRNA。试剂盒设有盒体、隔板、miRNA提取试剂瓶、茎环逆转录试剂瓶、实时荧光定量PCR试剂瓶。在200μL血浆充分裂解后加入所述试剂盒中提供的工作浓度为5n mol的血浆miRNA外源性参照,立即进行漩涡震荡15s,其余步骤同常规方法;应用所述试剂盒提供的茎环逆转录试剂将miRNA逆转录为cDNA;应用所述试剂盒提供的实时荧光定量PCR试剂将cDNA进行实时荧光定量PCR扩增;综合分析仪器给出的各项数据,设定合理的阈值和基线,进行分析。其特异性和敏感性高,可快速准确检测样本中miRNA的含量。 |
申请公布号 |
CN103773878A |
申请公布日期 |
2014.05.07 |
申请号 |
CN201410041147.5 |
申请日期 |
2014.01.28 |
申请人 |
厦门大学附属中山医院 |
发明人 |
张忠英;唐晶 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I;C12N15/11(2006.01)I;C12M1/34(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
厦门南强之路专利事务所(普通合伙) 35200 |
代理人 |
马应森 |
主权项 |
检测三种血浆miRNA的特异引物,其特征在于所述三种血浆miRNA分别是指hsa‑miR‑504、hsa‑miR‑133b、cel‑miR‑39;其中hsa‑miR‑504与hsa‑miR‑133b为人源性miRNA,cel‑miR‑39为线虫来源的miRNA,作为一种外源性参照miRNA,从血浆提取开始加入血浆中,作用在于能够从提取miRNA开始监测整个实时荧光定量PCR的全过程;所述检测三种血浆miRNA的特异引物包括三种血浆miRNA特异性逆转录引物和三种血浆miRNA特异性正向引物;所述三种血浆miRNA特异性逆转录引物由hsa‑miR‑504的特异性逆转录引物、hsa‑miR‑133b的特异性逆转录引物和cel‑miR‑39的特异性逆转录引物组成;所述hsa‑miR‑504的特异性逆转录引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.1 5'‑GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACGATAGAGT‑3';所述hsa‑miR‑133b的特异性逆转录引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.2 5'‑GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACTAGCTGGT‑3';所述cel‑miR‑39的特异性逆转录引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.3 5'‑GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACCAAGCTGA‑3';所述三种血浆miRNA特异性正向引物由hsa‑miR‑504的特异性正向引物、hsa‑miR‑133b的特异性正向引物和cel‑miR‑39的特异性正向引物组成;所述hsa‑miR‑504的特异性正向引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.4 5'‑GCTGGTTAAGACCCTGGT‑3';所述hsa‑miR‑133b的特异性正向引物核苷酸序列为SEQ ID NO.5 5'‑TAGCGTCTTTGGTCCCCT‑3';所述cel‑miR‑39的特异性正向引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.6 5'‑CAGAGTCACCGGGTGTAAAT‑3'。 |
地址 |
361004 福建省厦门市思明区湖滨南路201-209号 |