一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种银耳多糖和银耳蛋白的提取方法，包括：（1）银耳菌的活化培养和发酵培养；（2）超滤膜浓缩和破碎银耳孢子；（3）聚乙二醇/无机盐双水相体系的配制；（4）聚乙二醇/无机盐双水相体系提取；（5）冷冻干燥制备银耳多糖；（6）聚乙二醇/无机盐双水相体系二次提取，超滤膜过滤，冷冻干燥制备银耳蛋白。本发明可以实现银耳孢子生产和多糖提取的连续化、规模化，便于银耳多糖的工业化生产；得到的产物中既有银耳孢子的胞内多糖，又有银耳孢子液体发酵产生的胞外多糖，极大提高了银耳多糖的产率；并且使银耳多糖和蛋白质得到同时分离，避免了现有sevag法去除蛋白质的复杂操作和机溶剂污染的弊端，提高了多糖的纯度。

主权项

一种利用双水相体系提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将银耳菌接种到斜面培养基上，在24～26℃下活化培养6~8d，然后将银耳孢子接入到液体种子培养基中，在150~200r/min、24～26℃下培养3~5d，制得液体种子；将液体种子按5～10wt%的接种量接入液体发酵培养基中，在温度24～26℃、150～200r/min条件下，培养4～6天，制得发酵液；（2）将步骤（1）制得的发酵液采用截留分子量为3000～6000Dal的超滤膜浓缩，截留液为含有银耳孢子和胞外多糖的浓缩液，破碎银耳孢子，得到银耳孢子破碎液；（3）在25℃下，配制无机盐水溶液，向该无机盐水溶液中添加聚乙二醇，在总体系中无机盐质量百分比浓度为19%，聚乙二醇在总体系中的质量百分比浓度为21%，混合均匀，制得聚乙二醇/无机盐双水相体系；（4）向步骤（2）制得的银耳孢子破碎液中按体积比1: 1加入步骤（3）制得的聚乙二醇/无机盐双水相体系，搅拌10～30min混匀后，静置5～15min分相，制得无机盐下相和聚乙二醇上相；（5）将步骤（4）制得的无机盐下相离心分离，取上清液，采用截留分子量为3000～6000Dal的超滤膜浓缩，截留液经冷冻干燥后，制得银耳多糖；（6）向步骤（4）制得的聚乙二醇上相中加入水和无机盐，使无机盐在总体系中的质量浓度为19%，搅拌10～30min混匀后，静置10～20min分相，制得无机盐下相和聚乙二醇上相，将制得的无机盐下相，采用截留分子量为6000～10000Dal的超滤膜过滤，收集截留液，冷冻干燥制得银耳蛋白；所述无机盐为硫酸铵；所述步骤（3）、（6）中的双水相体系中的聚乙二醇分子量为1000。