多核苷酸装配的组合物和方法

摘要

本发明提供组合物和从大量组分多核苷酸快速装配为一个或多个装配好的多核苷酸的方法。本发明的方法使用环形核酸载体，所述载体包含DNA片段D，侧邻于可退火接头序列、可退火接头序列对LA和LB、或可退火接头序列/引物结合片段对LA和PB或PA和LB。限制性内切酶消化包含用于装配的DNA片段的大量载体以产生大量DNA片段，包括元件PA-D-LB、LA-D-LB、和LA-D-PB，或D-LB、LA-D-LB、和LA-D。可退火接头序列LA和LB提供了DNA片段的互补末端，其用于宿主细胞介导的同源重组或同时在聚合酶循环装配反应中与引物结合片段PA和PB反应，从而使多种DNA片段有序装配成为一个或多个装配好的多核苷酸。

主权项

一种组合物，其包含：(a)一个或多个第一核酸分子，其中每个第一核酸分子是环形的并以5’至3’方向包含：第一限制性酶切位点RA₀、选自组D₀的任意的DNA片段、可退火接头序列LB₀、和第二限制性酶切位点RB₀；(b)一个或多个中间核酸分子，其中每个中间核酸分子n是环形的并以5’至3’的方向包含：第一限制性酶切位点RA_n、第一可退火接头序列LA_n、选自组D_n的任意DNA片段、第二可退火接头序列LB_n、和第二限制性酶切位点RB_n，其中n表示从1到中间核酸分子数目的整数；和(c)一个或多个最后核酸分子，其中每个最后核酸分子是环形的并以5’至3’的方向包含：第一限制性酶切位点RA_m、第一可退火接头序列LA_m、选自组D_m的任意DNA片段、和第二限制性酶切位点RB_m，其中m表示比中间核酸分子数目大1的整数；其中RA₀至RB_m的所述限制性酶切位点可以被相同的IIS型限制性核酸内切酶切断；其中切断RA₀至RB_m的限制性酶切位点并变性所获得的线形核酸分子之后，每个可退火接头序列LB_（p‑1）能够与可退火接头序列LA_p的互补物杂交并作为合成互补多核苷酸的起始点，其中n是在1到（m‑1）范围内的整数，其中p表示从1到m的整数，其中所述可退火接头序列各自独立地是至少24个核苷酸长，并且其中每个组D₀，...D_n，...D_m独立地由一个或多个DNA片段组成。