一种基于免疫PCR和DNA熔解曲线分析的多重检测方法

摘要

本专利公开了一种基于免疫PCR和DNA熔解曲线分析的多重检测方法。其原理是用一组可通过PCR高效扩增且扩增产物的熔解温度相差较大的DNA分子分别标记免疫PCR检测中使用的检测物质如抗体或抗原。将DNA标记的检测物质混合成一个检测试剂进行免疫PCR。PCR产物再通过熔解曲线分析来分辨扩增产物中包含哪几种标记DNA。如果某一个DNA标记的特征熔解曲线峰存在，表明该DNA所标记的检测物质所检测的对象在样本中存在。各个峰的面积可用来计算所检测到的物质的相对含量。该方法特别适合10种以内病原体或其它抗原抗体的多重高灵敏度检测。

主权项

一种多重免疫PCR方法，其特征是，将免疫PCR与DNA熔解曲线分析相结合，先在反应基质中加入被检测物质特异性识别物质的混合物作为捕获试剂，然后加入被检测物质，在样品中的被检测物质被捕获试剂捕获后，加入特异性识别被检测物质、并连接了不同标记DNA的物质混合物作为检测试剂，待被检测物质与检测试剂结合后，在单管内通过PCR扩增不同的标记DNA并对其产物进行熔解曲线分析，实现在单管内对多种被检测物质的高灵敏度检测；所述的被检测物质是可以通过物质与物质的特异性作用而相互识别的物质，所述的不同的标记DNA其扩增产物的熔解温度即Tm值不同，彼此差别至少0.5摄氏度。