发明名称 |
一种特异性纳米金DNA探针的制备方法 |
摘要 |
本发明公开了一种特异性纳米金DNA探针的制备方法。该方法包括制备13nm纳米金颗粒AuNPs和将特异性探针连接到13nm纳米金颗粒AuNPs上两大步骤,该特异性探针包括16SrRNA保守序列的互补序列、夹着16SrRNA保守序列的互补序列的互补的两段互补的发夹序列、以及夹着16SrRNA保守序列的互补序列和两段互补的发夹序列的荧光分子FAM及其淬灭基团BHQ1。使用该方法制备的特异性纳米金DNA探针在对尿液样本进行检测时,显示出了相较于尿液样本传统细菌检测方法,更加显著、快速、灵敏和特异性强的优点。 |
申请公布号 |
CN103773756A |
申请公布日期 |
2014.05.07 |
申请号 |
CN201310495123.2 |
申请日期 |
2013.10.18 |
申请人 |
南京农业大学 |
发明人 |
刘斐;刘红蕊;曹静 |
分类号 |
C12N15/10(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I;C12Q1/04(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/10(2006.01)I |
代理机构 |
|
代理人 |
|
主权项 |
一种特异性纳米金DNA探针的制备方法,其特征在于:包括制备13nm纳米金颗粒AuNPs和将特异性探针连接到13nm纳米金颗粒AuNPs上两个步骤;所述制备13nm纳米金颗粒AuNPs的步骤包括:步骤1‑1取9.8ml ddH2O加热煮沸;步骤1‑2加入200μl预冷的50mM HAuCl4并伴随晃动;步骤1‑3加入1ml预冷的38.8mM二水合柠檬酸三纳并伴随晃动;步骤1‑4煮沸10min并伴随晃动;步骤1‑5在室温超声30min;所述将特异性探针连接到13nm纳米金颗粒AuNPs上的步骤包括:步骤2‑1取30μl20μM的DNA探针加入到新鲜制备的30μl50mM三(2‑羧乙基)膦TCEP中,并取10μl0.5M NaOH调节PH到5;步骤2‑21h后加入10nM13nm AuNPs100μl;步骤2‑31h后加入50mM PBS33μl,并在室温下超声10s,之后在50℃下加热10min;步骤2‑4在室温下连接12h,之后加入40μl50mM TCEP;步骤2‑51h后,加入0.01%SDS和8μl3M NaCl,并在室温下超声10s,之后在50℃下加热10min;步骤2‑6经过6h后,再次加入8μl3M NaCl,室温下超声10s,之后在50℃下加热10min;步骤2‑7重复步骤2‑6;步骤2‑8在室温下静置连接48h。 |
地址 |
210095 江苏省南京市玄武区卫岗1号 |