甜叶菊组织培养方法及其培养基

摘要

本发明涉及甜叶菊的组织培养繁殖方法及其培养基，尤其是涉及以甜叶菊叶片为外植体直接成芽的组织培养快繁方法。甜叶菊组织培养方法，包括以下步骤：(1)外植体采集，(2)消毒接种，(3)增厚诱导培养，(4)出芽成苗，(5)转接生根，(6)炼苗移栽。本发明提供的甜叶菊组织培养方法，取材容易，可以迅速扩繁出大量种源，外植体组织培养没有愈伤组织细胞增殖分化这一培养阶段，缩短了培养时间，并且有极高的增殖率，易操作，可大规模生产，且培养过程便于遗传转化等研究的操作。本发明所提供的培养基，确保叶片在各个阶段能达到预期培养目标。

主权项

甜叶菊组织培养方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)外植体采集对于室外栽培的植株，选取无病、虫损害的甜叶菊植株，采摘植株顶端第一、二对已经完全展开，但未老熟的叶片作为外植体；对于无菌组培苗，可使用长势良好、健康的组培苗的所有叶片；(2)消毒接种采摘自室外栽培植株的叶片用流水冲洗30分钟，在超净工作台上用75％酒精处理6～8秒后再用0.1％升汞浸泡8分钟，倒去升汞溶液，用无菌水冲洗4～5次，每次不少于半分钟，然后用无菌纸吸干表面水分并避免相互重叠，并接种到增厚诱导培养基中；组培苗叶片可不经消毒，在无菌条件下采摘后直接接种；接种时将完整的叶片正面接触增厚诱导培养基表面，若接种时叶片还存有叶柄，则将叶片基部弯曲，叶柄插入增厚诱导培养基，并保持叶片接触培养基；(3)增厚诱导培养叶片接种到增厚诱导培养基上后，培养至7～9天后叶片出现肉质增厚，叶片肉质增厚特征表现为，叶片增厚，表面密布透明颗粒，叶片质地脆而易断；(4)出芽成苗将第(3)步所得的肉质增厚叶片转接进入出芽成苗诱导培养基，在无菌培养室内，先完全遮光暗培养1周，再光培养1～2周后，叶片开始在中脉两侧或叶尖长出紫红色的芽，每片叶片出芽个数约8～14个，每一个芽经继续培养后颜色转绿，并独成一株再生苗，待苗生长至高3～5cm后进入下一步骤；(5)转接生根将3～5cm高的苗相互分开成单株，保证每株苗有叶片5～7枚，转接插入配置好的生根诱导培养基，生根培养约3周后，苗基部长出多条绿色根，并有明显白色根毛后，进行下一步骤；(6)炼苗移栽将生根的苗连同培养容器一同移出无菌培养室，在控制温度为正常室温的育苗室内放置2～3天后，揭开培养容器盖子或封口膜再放置2～3天，期间保持育苗室内湿度在80％以上，之后用清水洗净根上附着的培养基，移栽入喷洒过多菌灵500倍液的室外土壤中，并保持土壤湿润。