一种HBD3气管上皮特异性表达载体及其构建的重组细胞

摘要

本发明公开了一种包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞，构建了一种包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体Muc1-loxp-EGFP-HBD3，以及基于该载体的包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞系，利用该细胞系作为核供体细胞，为解决奶牛结核病的转基因奶牛提供坚实的基础。本发明通过电转染法将外源性表达载体Muc1-loxp-EGFP-HBD3导入牛胎儿成纤维细胞，荧光显微镜观察标记基因EGFP的表达情况，并经G418筛选获得阳性细胞，经PCR鉴定，证实目的基因HBD3整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组；最后，将转染HBD3基因的牛胎儿成纤维细胞作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚。

主权项

一种HBD3气管上皮特异性表达载体，其特征在于，包含目的基因HBD3，在HBD3基因的上游连接有SEQ.ID.NO.1所示的MUC1启动子序列，所述的HBD3基因的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.2所示；还在MUC1启动子序列的上游设有标记基因EGFP，EGFP基因的上游设有CMV启动子；所述的HBD3气管上皮特异性表达载体，还在目的基因HBD3的下游设有抗生素筛选基因neo基因；所述的neo基因的两侧还设有同向的Loxp序列；所述的HBD3气管上皮特异性表达载体，包括有以下元件：CMV‑EGFP‑MUC1‑HBD3‑Loxp‑neo‑Loxp。