一种基于多重微滴PCR偶联荧光分光光度法的生物基因定性、定量、高通量检测方法

摘要

本发明公开了一种基于多重微滴PCR偶联荧光分光光度法的生物基因定性、定量、高通量检测方法。首先，设计特异性引物并对其选择性地进行不同荧光基团标记，随后应用上述荧光标记的特异性引物进行微滴PCR扩增，扩增产物经纯化后，用荧光分光光度计或酶标仪来测量纯化后的PCR产物中各个发射波长和荧光值含量，达到自动检测的目的，可同时进行定性、定量和高通量检测。本发明方法可实现对大量目标DNA分子同时进行高通量的扩增和定性、定量和高通量检测。

主权项

一种基于多重微滴PCR偶联荧光分光光度法的生物基因定性、定量、高通量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，针对待测生物样品分别设计PCR特异性引物，并选择性对特异性引物进行不同荧光基团标记；所述荧光基团的激发光谱与发射光谱的带宽之和大于该荧光基团的斯托克斯位移；第二步，使用上述已标记荧光基团的特异性引物对在水油乳化剂中对相应的DNA模板进行多重微滴PCR扩增；第三步，PCR产物分离及纯化；第四步，用荧光分光度法对微滴PCR产物进行定性、定量、高通量检测分析：用不同的荧光基团标记不同的特异性引物，因而不同的PCR产物被不同荧光基团标记即待测生物样品由不同的荧光识别，用荧光分光度法根据荧光基团的发射波长对待测生物样品进行定性检测；同时，测量荧光的强度，通过标准曲线对待测生物样品进行定量检测；上述微滴PCR扩增过程中在等同的PCR参数下同时进行多重PCR反应，同时检测出至少7种待测生物样品，实现高通量检测。