一种去除调节性T细胞的特异性肿瘤疫苗的制备方法

摘要

本发明属于生物医学领域，特别公开了一种去除调节性T细胞的特异性肿瘤疫苗的制备方法。本发明通过去除淋巴细胞中CD4+CD25+调节性T细胞，获得了CD8+T淋巴细胞，能够大大增强T淋巴细胞杀伤肿瘤的作用，此细胞简称去除调节性T细胞的特异性肿瘤疫苗。本发明步骤简捷，操作简便，培养的细胞活化性好，对肿瘤细胞具有特异性杀伤作用，有效治愈肿瘤疾病，适于广泛推广应用。

主权项

一种去除调节性T细胞的特异性肿瘤疫苗的制备方法，其特征为，主要包括如下步骤：（1）采集患者60~120ml的自体外周血，采用Ficoll‑Paque Plus试剂分离其中的单个核细胞，置于全营养培养基中培养，所述全营养培养基为添加青/链霉素和10%FBS的1640培养基，并将培养基置于CO₂细胞孵育箱内放置2小时后收集悬浮液，离心获得T淋巴细胞群，贴壁的DC细胞加DC培养基继续培养，第6天开始，收集含有非贴壁细胞的培养上清，更换培养基，共两天，合并所收集的上清，离心获得DC细胞；（2）DC细胞用相应的肿瘤抗原刺激，使DC在细胞在体外致敏，得到致敏的DC细胞；（3）T淋巴细胞群通过磁性分选获取CD8+T淋巴细胞；（4）将致敏的DC细胞和分选出的CD8+T淋巴细胞混合培养，携带肿瘤抗原的DC细胞将抗原信息提呈给CD8+T淋巴细胞并使之活化，得到特异性肿瘤疫苗。