非洲猪瘟病毒的荧光定量PCR检测试剂、试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了一种非洲猪瘟病毒的荧光定量PCR检测试剂、试剂盒及其检测方法，所述检测试剂是针对以非洲猪瘟病毒VP72基因的保守片段为靶目标的，包括一对特异性引物、一条特异性探针和一条内标探针。试剂盒包括PCR混合液、Taq DNA聚合酶、DEPC-H₂O、ASFV阳性质控品、ASFV阴性质控品、定量用标准品和假病毒内标溶液；PCR混合液中含有一对特异性引物、一条特异性探针和一条内标探针。检测方法包括：总DNA提取、反应组分配制、标准品稀释制作标准曲线、扩增、结果判定。本发明的试剂和试剂盒特异性强、灵敏度高、无污染、高通量、可对低含量非洲猪瘟病毒感染、隐性感染或持续带毒宿主进行准确检测，检测方法快速、特异、敏感、可定量、可同时检测大量样品。

主权项

一种非洲猪瘟病毒的荧光定量PCR检测试剂，其特征在于，所述检测试剂是针对以非洲猪瘟病毒VP72基因的保守片段为靶目标的，包括：引物：ASFV‑PF205：5′‑ACTACGGAGGCAATTCGATTA‑3′ASFV‑PR285：5′‑GTTAATATGACCACTGGGTTGGTA‑3′探针： ASFV‑Pb229： 5′‑CCCCCGATGATCCGGGTGCG‑3′内标探针：ASFV‑PbIC： 5′‑CCCACGTGACCGCTGGCGTG‑3′，所述探针和内标探针的5′端有用荧光染料标记的荧光报告基团，所述探针和内标探针的3′端有用淬灭荧光染料标记的荧光淬灭基团；所述非洲猪瘟病毒VP72基因的保守片段的扩增目标核苷酸序列为：ACTACGGAGGCAATTCGATTAAAACCCCCGATGATCCGGGTGCGATGATGATTACCTTTGCTTTGAAACCACGGGAGGAATACCAACCCAGTGGTCATATTAAC。