一种用于诱导表达锌指核酸酶的载体及其应用

摘要

本发明公开了一种诱导表达锌指核酸酶的载体及其应用。该载体含有ColE1ori、Amp^r基因，以及四个表达盒；从上游到下游，表达盒1依次包括P_CMV IE、Puro^r和SV40polyA，表达盒2依次包括P_CMV、rtTA-Advanced和SV40polyA，表达盒3依次包括TRE_mod、P_minCMV、DNA片段1和SV40polyA，表达盒4依次包括TRE_mod、P_minCMV、DNA片段2和SV40polyA。实验证明，本发明具有如下优点：本发明所提供载体中带有一个用于药物筛选的基因，在转染效率低的条件下便于筛选和富集阳性细胞；本发明所提供载体将两个ZFN质粒整合到一起，故只要转染单个质粒即可，简化了转染环节；采用可诱导表达ZFNs的方法，控制ZFNs的表达时机，降低ZFNs对细胞的毒性。

主权项

用于诱导表达作用于靶基因的锌指核酸酶环形载体，含有大肠杆菌复制起始区、氨苄青霉素抗性基因，以及表达盒1、表达盒2、表达盒3和表达盒4；所述表达盒1从上游到下游依次包括如下元件：P_CMV IE、Puro^r和SV40polyA；所述表达盒2从上游到下游依次包括如下元件：P_CMV、rtTA‑Advanced和SV40polyA；所述表达盒3从上游到下游依次包括如下元件：TRE_mod、P_minCMV、DNA片段1和SV40polyA；所述表达盒4从上游到下游依次包括如下元件：TRE_mod、P_minCMV、DNA片段2和SV40polyA；所述DNA片段1和所述DNA片段2满足如下条件：所述DNA片段1编码的蛋白和所述DNA片段2编码的蛋白均含有能够与所述靶基因特异性结合的锌指结构域，以及能够切割所述靶基因的Fol kⅠ结构域。