代谢进化方法

摘要

本发明涉及代谢途径中天然芳族小分子产物的变体的代谢进化方法，其通过采用至少一种基因A的基因嵌合体来体细胞体内组装和重组所述代谢途径，所述方法包括：a)在单个步骤过程中，(i)用与作为细胞基因组的主要部分或存在于基因构建体的框架中的待重组的另一基因的序列同源性小于99.5%的至少一种基因A转化细胞，(ii)重组所述基因，(iii)在靶基因组的整合位点产生所述基因的基因嵌合体，其中所述至少一种基因A在与所述整合位点的5′或3′端锚定的5’端或3’端具有单侧翼靶序列，(iv)重组所述代谢途径的最终的其它基因，和b)选择能够表达所述变体的包括所述基因嵌合体和所述最终的其它基因的克隆，本发明涉及产生代谢途径中天然芳族小分子产物的变体的细胞文库的制备方法，和由此产生并用于制备所述变体的文库。

主权项

一种代谢途径中天然芳族小分子产物变体的代谢进化方法，其通过采用至少一种基因A的基因嵌合体来体细胞体内组装和重组所述代谢途径来进化，所述方法包括：a)在单个步骤过程中，(i)用与作为细胞基因组的整合部分或存在于基因构建体框架中的待重组的另一基因的序列同源性小于99.5%的至少一种基因A转化细胞，(ii)重组所述基因，(iii)在靶基因组的整合位点产生所述基因的基因嵌合体，其中所述至少一种基因A在与所述整合位点的5′或3′端锚定的5’端或3’端具有单侧翼靶序列，(iv)重组所述代谢途径的最终的其它基因，和b)选择能够表达所述变体的包括所述基因嵌合体和所述最终的其它基因的克隆。