一种肝纤维化诊断的快速定量试纸条的制备方法

摘要

本发明涉及一种基于上转换发光技术的免疫层析试纸条，检测试剂盒以及试纸条的制造方法，所述试纸条包括粘性底衬（5），在粘性底衬（5）的一侧是分析膜（3），另一侧是吸水垫（4），分析膜（3）上有结合垫（2），结合垫（2）中有基质金属蛋白酶抑制剂TIMP-1抗体的上转换发光材料（UCP）结合物（6）。该试纸条应用快速、简便、定量，可为肝纤维化的预防、诊断、治疗提供支持。

主权项

一种免疫层析试纸条的制造方法，所述的免疫层析试纸条包括粘性底衬（5），在粘性底衬（5）的一侧设置分析膜（3），另一侧设置吸水垫（4），分析膜（3）上有结合垫（2），结合垫（2）中有基质金属蛋白酶抑制剂TIMP‑1抗体的上转换发光材料UCP结合物（6）；包括以下步骤：（1）包被将TIMP‑1单抗稀释到2mg/ml，作为T线包被液，将羊抗鼠IgG稀释到2mg/ml，作为C线包被液；通过喷膜机，将T线包被液和C线包被液包被到硝酸纤维素膜上晾干，即获得单克隆抗体包被膜条；（2）制备UCP标记单抗a)  称取10 mg UCP颗粒置于锥形瓶中，b)  加入10 ml pH=7.2 0.20M PB，c)  在UCP颗粒悬浊液中加入0. 5 mg TIMP‑1抗体，再加入无水戊二醛至终浓度1%，37℃搅拌过夜，d)  12000rpm，4℃，离心15min，弃上清，e)  UCP沉淀物中加入10ml pH=7.2 0.20M PB，混匀，f)  12000rpm，4℃，离心15min，弃上清，g) 收集UCP沉淀物待用；（3) 制备冻干结合垫 a)   将50ml UCP标记物悬浊液，12000rpm，4℃，离心30min，弃上清，b)   加入45ml的冻干液，pH=7.2 0.20M PB，含2%BSA，3%蔗糖，c)   将UCP标记物悬浊液按5cm²/ml加于玻璃纤维上,d)   真空冻干11h；（4）裁剪结合垫；将冻干的结合垫裁剪成1cm宽的长条；（5）组装试纸条；依次将硝酸纤维素膜、吸水纸、结合垫、样品垫贴到底板上，切成4.0mm宽的纸条。