高活性降血压肽及其制备方法

摘要

本发明涉及高活性降血压肽及其制备方法。其中，该高活性降血压肽具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。本发明的高活性降血压肽，成本低，血管紧张素转化酶抑制活性高，能够有效地抑制血管紧张素转化酶的活性，从而能够有效地应用于治疗高血压药物的制备。

主权项

一种制备由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列构成的高活性降血压肽的方法，其特征在于，包括：利用碱提酸沉法从脱脂核桃粉中提取核桃蛋白；利用蛋白酶对所述核桃蛋白进行水解，以便获得水解产物；以及对所述水解产物依次进行超滤处理、第一凝胶色谱处理、第二凝胶色谱处理和反相高效液相色谱处理，以便获得所述高活性降血压肽，其中，利用碱提酸沉法从脱脂核桃粉中提取核桃蛋白包括：将所述脱脂核桃粉与水按照重量比1：10的比例进行混合，并使所得到的混合物在pH8.0、温度65摄氏度下进行水解5小时，以便获得碱提产物；将所述碱提产物进行第一离心，并收集第一离心上清液；将所述第一离心上清液在pH4.5下进行酸沉，以便获得酸沉产物；将所述酸沉产物进行第二离心，并收集第二离心沉淀物；以及将所述第二离心沉淀物进行水洗至中性，以便获得所述核桃蛋白，利用碱提酸沉法从脱脂核桃粉中提取核桃蛋白进一步包括将所述核桃蛋白进行真空冷冻干燥，所述蛋白酶为选自木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和碱性蛋白酶的至少一种，其中，当所述蛋白酶为木瓜蛋白酶时，利用所述木瓜蛋白酶对所述核桃蛋白进行水解的料液比为25g/L，加酶量为3%（质量/体积），pH值为6，水解温度为50℃，水解时间为4h，当所述蛋白酶为胃蛋白酶时，利用所述胃蛋白酶对所述核桃蛋白进行水解的料液比为25g/L，加酶量为4%（质量/体积），pH值为2，水解温度为55℃，水解时间为4h，当所述蛋白酶为碱性蛋白酶时，利用所述碱性蛋白酶对所述核桃蛋白进行水解的料液比为25g/L，加酶量为7%（质量/体积），pH值为10，水解温度为60℃，水解时间为2h，对所述水解产物依次进行超滤处理、第一凝胶色谱处理、第二凝胶色谱处理和反相高效液相色谱处理包括：利用截留分子量不超过30000的超滤膜对所述水解产物进行超滤处理，以便得到滤液；将所述滤液进行第一凝胶色谱处理并对所得到的各组分进行血管紧张素转化酶抑制活性检测，以便得到血管紧张素转化酶抑制活性最高的组分作为第一凝胶色谱产物；将所述第一凝胶色谱产物进行第二凝胶色谱处理并对所得到的各组分进行血管紧张素转化酶抑制活性检测，以便得到血管紧张素转化酶抑制活性最高的组分作为第二凝胶色谱产物；以及将所述第二凝胶色谱产物进行反相高效液相色谱处理并对所得到的各组分进行血管紧张素转化酶抑制活性检测，以便得到血管紧张素转化酶抑制活性最高的组分作为所述高活性降血压肽，其中，所述第一凝胶色谱处理采用Sephadex G‑25Medium柱，流动相为10mM pH7.0的Tris‑HCl，流速为1ml/min，所述第二凝胶色谱处理采用Superdex^TM Peptide10/300GL柱，流动相为20mM pH7.0的PBS，流速为0.5ml/min，所述反相高效液相色谱处理采用Zorbax SB‑C18柱，流动相A为0.06%TFA的水，流动相B为0.05%TFA的乙腈，流速为0.8ml/min。