发明名称 |
一种基于Caco-2细胞模型的抗氧化剂抗氧化活性定量评价方法 |
摘要 |
一种基于Caco-2细胞模型的抗氧化剂抗氧化活性定量评价方法,涉及抗氧化剂。利用Caco-2细胞模型,通过优化细胞的接种浓度和培养时间,荧光探针(2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐,简称DCFH-DA)、自由基引发剂(2,2’-偶氮二异丁基脒,简称AAPH)和抗氧化剂纯品与Caco-2细胞的孵育条件,建立一种基于Caco-2单层细胞模型的抗氧化剂抗氧化活性细胞学定量评价方法,具有生物相关性高、简单、快速的优点,为生物抗氧化剂的研究提供一个有效的分析评价工具。 |
申请公布号 |
CN103760144A |
申请公布日期 |
2014.04.30 |
申请号 |
CN201410022545.2 |
申请日期 |
2014.01.17 |
申请人 |
深圳职业技术学院 |
发明人 |
刘冬;孙海燕;万红霞;李艳;从彦丽;唐旭蔚 |
分类号 |
G01N21/64(2006.01)I |
主分类号 |
G01N21/64(2006.01)I |
代理机构 |
厦门南强之路专利事务所(普通合伙) 35200 |
代理人 |
马应森 |
主权项 |
一种基于Caco‑2细胞模型的抗氧化剂抗氧化活性定量评价方法,其特征在于包括以下具体步骤: 1)将100~200L的Caco‑2单细胞悬浮液按1×10<sup>4</sup>~1×10<sup>5</sup>个细胞/孔的浓度接种至透明平底黑色96微孔细胞培养板中培养; 2)将步骤1)的96微孔板中生长培养基移出,用100~200L1×PBS清洗贴壁细胞; 3)用含有20~100M DCFH‑DA的抗氧化剂处理培养基配制6个不同浓度的抗氧化剂溶液; 4)将步骤3)得到的抗氧化剂溶液100~200L加入步骤1)的96微孔板中,记为样品孔,孵育,对照孔和空白孔为只含有20~100M DCFH‑DA的抗氧化剂处理培养基处理的细胞孔,每个样品、对照和空白各3个重复孔; 5)将步骤4)的96微孔板中溶液移出,用100~200L1×PBS清洗贴壁细胞; 6)向步骤5)的样品孔和对照孔中加入100~200L含有200~800M AAPH的氧化剂处理培养基,空白孔加入100~200L氧化剂处理培养基; 7)用荧光酶标仪测定步骤6)中96微孔板中各孔的荧光强度; 8)根据步骤7)做出各样品孔和对照孔荧光强度—时间曲线,计算各种抗氧化剂的细胞学抗氧化活性,用槲皮素作标准品,各抗氧化剂样品的细胞学抗氧化活性值用 mol槲皮素当量/100g(或 mol)样品表示。 |
地址 |
518055 广东省深圳市南山区西丽深圳职业技术学院 |