| 摘要 |
1. Биотрансплантат для лечения хронической ишемии нижних конечностей, характеризующийся тем, что содержит мультипотентные стромальные клетки, полученные из пупочного канатика при нормальных родах, трансфицированные геном VEGF-165, характеризующиеся иммунофенотипом CD29+, CD44+, CD73+, CD90+, CD105+, CD14-, CD31-, CD45- CD11b-, HLA-DR-, способные к направленной дифференцировке в остеогенном, хондрогенном и адипогенном направлениях.2. Биотрансплантат по п.1, характеризующийся тем, что мультипотентные стромальные клетки получают из пупочного канатика при нормальных родах.3. Способ получения биотрансплантата для лечения ишемии нижних конечностей по п.1, характеризующийся тем, что пупочные канатики измельчают, заливают 5-7 мл дезагрегирующего раствора с добавлением колагеназы I типа, 1 U/мл, и диспазы, 0,5 U/мл и инкубируют при 37°С в течение 30-60 мин, периодически встряхивая, осадок клеток ресуспендируют в ростовой среде DMEM/F12, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 2 мМ L-глутамина, 1% пенициллина-стрептомицина, наращивают клетки до достижения субконфлюентного монослоя, после чего снимают стандартным способом раствором трипсина-Версена, на следующем этапе производят аденовирусную конструкцию, несущую ген VEGF-165, для чего вначале получают линеаризованную форму вектора, которую отделяют от кольцевой формы электрофорезом в агарозном геле с последующей элюцией из геля, производят амплификацию рекомбинантной плазмиды, производят сбор амплифицированных аденовирусных частиц, затем проводят трансфекцию культуры мультипотентных стромальных клеток пупочного, при этом используют аденовирусные частицы в конечной концентрации 100 БОЕ/мл среды, котор� |
