极地雪藻固定化保种方法

摘要

本发明属于微藻养殖领域，尤其涉及一种极地雪藻固定化保种方法。极地雪藻传统保种方法存在很多缺点：保种时间短，为1-2年，营养盐消耗快，培养基易老化，需频繁更换培养基，工作量大，细胞存活率低，易污染。本发明用蛋白胨代替传统的褐藻酸钠或琼脂作为主要固定剂，且在培养基中增加了柠檬酸铁、山梨酸钾、葡萄糖、海泥抽提液、土壤抽出液等营养成分，并添加了乙二醇作为抗冻剂，接种后的培养基置于温度为-50±2℃、光照强度200-400lx的低温、弱光培养箱中保存。新方法能显著提高藻细胞的存活率，大大降低工作量，不易污染，种质纯正，保种时间长达6-8年而且保种成本降为原来的1/3。

主权项

一种极地雪藻固定化保种所用软蛋白胨固体培养基，其特征在于配方如下：A溶液：NH₄NO₃40毫克，NaNO₃5毫克，尿素5毫克，KH₂PO₄1.8毫克，Na₂SiO₃8毫克，NaHCO₃500毫克，九二0植物生长刺激素8国际单位，山梨酸钾10毫克，葡萄糖50毫克、海藻酸丙二醇酯15毫克，环己基氨基磺酸钠20毫克，蜂胶9毫克，麦芽糖醇8毫克，硬脂酰乳酸钠8毫克，焦磷酸铁4毫克，柠檬酸钾6毫克，乙酸钠5毫克，山梨糖醇液1毫升，三聚甘油单硬脂酸酯10毫克，人尿1毫升，海泥抽取液1毫升，土壤抽出液2毫升，煮沸纯净淡水1000毫升；B溶液：即f/2微量元素溶液：ZnSO₄·4H₂O23毫克，MnCl₂·4H₂O178毫克，CuSO₄·5H₂O10毫克，FeC₆H₅O₇·5H₂O3.9克，Na₂MoO₄·2H₂O7.3毫克，CoCl₂·6H₂O12毫克，Na₂EDTA4.35克，蒸馏水1000毫升；将上述A、B溶液煮沸消毒后，装入高压灭菌过的棕色试剂瓶中置于4℃冰箱低温保存；C溶液配制完后装入高压灭菌过的棕色试剂瓶，置于4℃低温冰箱备用；从冰箱中取出上述A和B两种溶液进行混合，使用前两个棕色瓶均充分摇匀，取A溶液1000毫升，B溶液1毫升，混合于1500毫升的三角烧瓶中；混合液用1％的氢氧化钠溶液调节值到7.5左右，按重量比6‰的比例称重蛋白胨，加入三角烧瓶中，搅拌均匀，再加入重量比0.5‰的乙二醇，搅拌3分钟，后置于电热炉上加热融化；培养液分装于100毫升的三角烧瓶中，分装量30毫升，三角烧瓶瓶口用无菌培养容器封口膜封口；将上述配制好的固体培养基置于高压灭菌锅中灭菌，温度121℃，灭菌20‑30分钟，取出冷却，即可。