免疫层析测试中信号放大的方法以及使用该方法的免疫层析试剂盒

摘要

本发明涉及用于分析物的高灵敏度检测的免疫层析测试中放大信号的方法和使用该方法的免疫层析试剂盒，该方法通过区分第一指示剂的大小和第二指示剂的大小来控制流速实现放大信号。本发明的一个方面提出了在免疫层析测试中放大信号的方法，包括：将具有能特异性结合分析物第一表位的第一抗体、连接体、和与第一抗体和连接体结合的第一指示剂的第一偶联体与分析物结合；将结合在第一偶联体上的分析物与能特异性结合分析物第二表位的固定的第二抗体相结合；将具有能特异性结合第一偶联体的连接体的第三抗体，和连接第三抗体的第二指示剂的第二偶联体与第一偶联体的连接体结合，其中第一偶联体比第二偶联体更接近固定的第二抗体，并且第二指示剂的颗粒大于第一指示剂的颗粒，使得第二偶联体比第一偶联体更晚到达固定的第二抗体。根据本发明的另一个方面，一种免疫层析试剂盒包括：样品垫，含有分析物的液体样品施加到垫上；偶联物垫，包括具有特异性结合分析物的第一表位的第一抗体、连接体、与第一抗体和连接体结合的第一指示剂的第一偶联体、和具有特异性结合第一偶联体的连接体的第三抗体和与第三抗体结合的第二指示剂的第二偶联体，其中第一偶联体比第二偶联体更接近固定的第二抗体，并且第二指示剂大于第一指示剂，使得第二偶联体迟于第一偶联体到达固定的第二抗体；膜，包括检测位点，其上固定的第二抗体能特异性结合与第一偶联体结合的分析物的第二表位，和用于检测偏差的对照位点；和吸收垫，通过毛细管现象吸收液体样品。因此，本发明可以实现信号放大而无需另外的机械控制或人工逐步反应。

主权项

一种在免疫层析测试中放大信号的方法，包括：将具有能特异性结合分析物第一表位的第一抗体、连接体、和与第一抗体和连接体结合的第一指示剂的第一偶联体与分析物结合；在夹心反应中将结合在第一偶联体上的分析物与能特异性结合分析物第二表位的固定的第二抗体相结合；在夹心反应后将第二偶联体与第一偶联体的连接体结合，所述第二偶联体具有能特异性结合第一偶联体的连接体的第三抗体、和连接第三抗体的第二指示剂，其中，第一偶联体比第二偶联体更接近固定的第二抗体，并且所述第一指示剂的颗粒大小是约10nm到约20nm，而第二指示剂的颗粒大小是约20nm到约60nm，其中第二指示剂的颗粒大于第一指示剂的颗粒，使得第二偶联体比第一偶联体更晚到达固定的第二抗体。