一种ODS协同HSCCC提取酱油渣中大豆异黄酮的方法

摘要

本发明公开了一种ODS协同HSCCC提取酱油渣中大豆异黄酮的方法，该方法将酱油渣提取物经MPLC纯化，洗脱；将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水放置，分离上相与下相；以上相作为固定相，下相为流动相，制得分离样品溶液；将上相作为固定相泵入高速逆流色谱仪，将下相为流动相，将流动相泵入到多层胶管前端；注入加有ODS的上相与下相的混合液，每毫升每毫升上相与下相的混合物中的混合物中加入ODS150‐250毫克，进行高速逆流色谱分离，得大豆异黄酮。本发明在逆流色谱柱中引入ODS，利用逆流色谱的液液分配及其硅胶微球改性基团吸附的协同作用，改善强极性天然产物的分离效果，将有效解决高速逆流色谱中强极性物质分离的难题。

主权项

一种ODS协同HSCCC提取酱油渣中大豆异黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）粗提物的制备：将酱油渣提取物经MPLC纯化，以乙醇‐蒸馏水为洗脱液，流速为15‐25ml/min进行梯度洗脱，然后将溶剂减压浓缩，得到大豆异黄酮粗提物，置冰箱保存；（2）样品溶液的制备：将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水加入到分液漏斗中，充分震荡后放置12‐24小时，将上相与下相分离；按体积份数计，正己烷为100份，乙酸乙酯为150‐200份，甲醇为150‐250份，水为150‐200份；以上相作为固定相，下相为流动相；将100体积份上相与80‐130份下相混合，每毫升上相与下相的混合物中溶解大豆异黄酮粗提物3‐15毫克，制得分离样品溶液；（3）高速逆流分离：高速逆流分离：将上相作为固定相泵入高速逆流色谱仪，将高速逆流色谱仪的多层胶管柱充满；当高速逆流色谱仪稳定运行时，将下相为流动相，将流动相泵入到多层胶管前端；当有15‐25ml的固定相被推出的时候，注入1‐3ml加有ODS的上相与下相的混合液，每毫升每毫升上相与下相的混合物中的混合物中加入ODS150‐250毫克；当有流动相从多层胶管尾端流出时，将5‐15ml分离样品溶液从进样口注入，再补充注入10‐20ml固定相，进行高速逆流色谱分离，得大豆异黄酮。