一种用于食品病原微生物鉴定的单个核酸分子检测技术

摘要

本发明公开了一种用于食品病原微生物鉴定的单个核酸分子检测技术，检测步骤如下：（1）提取病原微生物基因组和基因组片段化；（2）设计和制备探针；（3）探针与基因组DNA片段进行杂交反应；（4）探针与杂交体固定于丙烯酰胺胶中，电泳去除未杂交上去的片段和未胶连上去的分子；（5）核酸分子固相原位扩增；（6）信号检测，判断病原菌是否存在。本发明采用单个核苷酸分子捕获、扩增与检测技术，实现了原病微生物快速高效检测的目的，具有十分重要的应用前景和使用价值。本发明不仅可用于微生物鉴定，还可用于实验室、生产和临床中某些含量较低，且具有重要分析或诊断意义的分子的检测。

主权项

一种用于食品病原微生物鉴定的单个核酸分子检测技术，其特征在于，检测步骤如下：（1）分离待检测食品中的微生物，并提取基因组DNA；采用超声波或DNA破碎酶将上述基因组DNA随机打断成200～1000bp的片段；（2）用DNA合成仪合成一条探针，并用丙烯酰胺对探针进行标记；（3）将步骤（2）中标记后的探针与步骤（1）中打断的基因组DNA片段杂交；（4）将步骤（3）中杂交后的溶液与丙烯酰胺贮存液混合，将均匀混合液平铺于基片上进行凝固形成胶，然后用非变性电泳液电泳去除未杂交上去的片段和未胶连上去的分子；（5）向步骤（4）中电泳后的胶上滴加核酸分子扩增反应液、核酸荧光染料混合液，将混合液与胶一起密封在基片上并置于控温装置中，进行核酸分子原位扩增；（6）用分辨率高于2048×2048的荧光显微镜或扫描仪进行荧光信号采集，根据阳性点的数量判断待检测样本的病原菌是否存在。