提高井冈霉素发酵水平的方法

摘要

一种提高井冈霉素发酵水平的方法，通过在吸水链霉菌井冈变种5008中双缺失转录负调控基因SHJG7318和SHJG4003，实现井冈霉素产量和产率的提高。本发明所得到工程菌株井冈霉素的发酵产量提高50％以上，抗生素合成速率加快，生产率由2.1克／升／天提高到4.1克／升／天，提高幅度近一倍。

主权项

一种提高井冈霉素发酵水平的方法，其特征在于：通过在吸水链霉菌井冈亚种5008染色体上引入基因突变，导致转录负调控基因SHJG7318和SHJG4003的双失活，使井冈霉素在发酵中的产量得以提高；具体步骤如下：第一步：设计并构建用于SHJG7318进行失活的同源重组质粒载体I和用于SHJG4003失活的同源重组质粒载体II；第二步：将第一步构建得到的质粒载体I结合转移导入受体菌吸水链霉菌5008井冈亚种中进行同源重组；第三步：通过对突变株的筛选和验证硫链丝菌素抗性验证，并通过PCR产物片段大小的差异筛选得到SHJG7318突变株；第四步：将第一步构建得到的质粒载体II结合转移导入第三步构建得到的SHJG7318突变株中进行同源重组；第五步：通过对突变株的筛选和验证硫链丝菌素抗性验证，并通过PCR产物片段大小的差异筛选得到SHJG7318和SHJG4003的双缺失突变株。