一种热带植物多糖多酚小RNA提取方法

摘要

本发明公开了一种热带植物多糖多酚小RNA提取方法，该热带植物多糖多酚小RNA提取方法包括以下步骤：采样热带植物叶片，冻入液氮，-80℃保存；准备小RNA提取的试剂，CTAB裂解缓冲液、PEG8000沉淀缓冲液、EDC交联缓冲液、miRNA Northern blotting杂交缓冲液、7%dPAGE、Washing Buffer；按照小RNA提取的预处理、Trizol抽提、分级沉淀高分子量RNA、沉淀小RNA，提取小RNA；按照17%dPAGE分离、转膜及交联、miRNA杂交及洗膜、小RNA杂交及洗膜、曝光及保存，实现RNA杂交；miRNA stem-loop RT-PCR扩增；开展多糖多酚植物小RNA的提取以及检测分析。本发明克服了目前植物小RNA提取方法的不足，具有快速、稳定、操作简便的特点，可以针对miRNA和siRNA进行快速提取和检测分析，具有广泛的应用前景。

主权项

一种热带植物多糖多酚小RNA提取方法，其特征在于，该热带植物多糖多酚小RNA提取方法包括以下步骤：步骤一、采样热带植物叶片，冻入液氮，‑80℃保存；步骤二、准备小RNA提取的试剂，CTAB裂解缓冲液、PEG8000沉淀缓冲液、EDC交联缓冲液、miRNANorthernblotting杂交缓冲液、7%dPAGE、WashingBuffer；步骤三、按照小RNA提取的预处理、Trizol抽提、分级沉淀高分子量RNA、沉淀小RNA，提取小RNA；步骤四、按照17%dPAGE分离、转膜及交联、miRNA杂交及洗膜、小RNA杂交及洗膜、曝光及保存，实现RNA杂交；步骤五、miRNAstem‑loopRT‑PCR扩增；步骤六、开展多糖多酚植物小RNA的提取以及检测分析。