一株重组大肠杆菌及其在制备抗O157:H7的N-糖蛋白疫苗中的应用

摘要

本发明公开了一株重组大肠杆菌，命名为重组大肠杆菌CBEB，是将构建的重组质粒p-pglB-malE^M和p-rfb共转化大肠杆菌CLM24中获得，其基因型是W3110 Δwaal/p-pglB-malE^M+p-rfb。利用本发明所述重组大肠杆菌发酵制备抗O157:H7 N-糖蛋白疫苗，生产步骤简单，生产周期短，产量高，生产成本低，可以应用于抗O157:H7 N-糖蛋白疫苗的大规模生产；且本发明方法生产的抗O157:H7 N-糖蛋白疫苗具有良好的免疫效果，为抗细菌感染的免疫治疗提供了新的选择，提示具有良好的工业开发和应用前景。

主权项

一株重组大肠杆菌，该菌命名为重组大肠杆菌CBEB，其特征在于：所述重组大肠杆菌由如下方法制得：构建含malE^M和pglB基因的共表达载体p‑pglB‑malE^M，再构建含rfb基因簇的表达载体p‑rfb，然后将上述构建的重组质粒p‑pglB‑malE^M和p‑rfb共转化大肠杆菌CLM24中，得到能同时表达pglB、malE^M基因和rfb基因簇的重组大肠杆菌CBEB，其基因型是W3110Δwaal/p‑pglB‑malE^M+p‑rfb；其中，所述malE^M来源于质粒pMAL‑p5X，所述pglB基因来源于空肠弯曲杆菌NCTC11168，共表达malE^M和pglB基因的载体为pBAD24；所述rfb基因簇来源于大肠杆菌O157:H7；表达rfb基因簇的载体为pYES1L；上述malE^M为malE基因突变体，是通过在malE基因的3’末端插入一段核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的表达糖基化序列的基因所得；上述大肠杆菌CLM24是通过敲除出发菌株大肠杆菌W3110的waal基因而构建的大肠杆菌工程菌，其基因型为W3110Δwaal，命名为大肠杆菌CLM24。