一种适用于双向电泳实验的蚯蚓总蛋白的提取方法

摘要

本发明公开了一种适用于双向电泳实验的蚯蚓总蛋白的提取方法，步骤为：取新鲜的或-80℃保存的蚯蚓用液氮研磨成蚯蚓粉末，加入蛋白提取液中，涡旋混匀，沉淀；离心，弃上清，加入二硫苏糖醇的丙酮溶液洗涤沉淀，洗涤后离心；用二硫苏糖醇溶液洗涤沉淀，离心，挥干液体；取沉淀溶解于蛋白裂解液中，涡旋混匀，冰浴静置；加入二硫苏糖醇，涡旋混匀，冰上静置；冰浴下，超声，离心，取上清-80℃分装保存；本发明的方法在操作步骤少，耗时短，简单易行的基础上，弥补了简单沉淀不能够有效去除蚯蚓样品当中的脂类、多糖和酚类等杂质的不足。此方法处理得到的双向电泳谱图中，蛋白点能够分布在一个宽泛的等电点和分子量范围内。

主权项

一种适用于双向电泳实验的蚯蚓总蛋白的提取方法，其特征是包括如下步骤：1）取新鲜或‑80℃保存的蚯蚓在预冷的研钵中用液氮研磨成蚯蚓粉末；2）取1g蚯蚓粉末加入20ml蛋白提取液中，涡旋2‑6分钟混匀，于‑20℃沉淀6‑16小时；离心，弃上清，加入10‑30ml质量浓度为0.3%二硫苏糖醇的丙酮溶液洗涤沉淀，洗涤后于4℃，离心30分钟，再重复洗涤、离心操作2次；3）用质量浓度为0.3%的二硫苏糖醇溶液洗涤沉淀，12000×g的离心条件下，离心30分钟，弃上清，挥干沉淀中残余的液体，所述二硫苏糖醇溶液的溶剂为体积浓度为70%‑90%的丙酮水溶液；4）取0.1‑0.3g步骤（3）获得的沉淀溶解于1ml蛋白裂解液中，涡旋混匀，冰浴静置5分钟；加入二硫苏糖醇使其终浓度为40‑100mM，涡旋混匀，冰上静置10分钟；5）冰浴下，以250‑350W功率，2s/6s超声25‑35个循环，13500×g离心40分钟，取上清‑80℃分装保存；所述蛋白提取液用下述方法制成：取10‑30g三氯乙酸和0.3g二硫苏糖醇加丙酮至100ml溶解；所述蛋白裂解液用下述方法制成：取4.2g尿素、1.52g硫脲和0.2g3‑[(3‑胆固醇氨丙基)二甲基氨基]‑1‑丙磺酸用去离子水定容至10ml。