基于气孔感应小球藻闭合的免疫蒸腾抑制剂的制备方法

摘要

本发明涉及基于气孔感应小球藻闭合的免疫蒸腾抑制剂的制备方法。本发明方法首先将来自科学院典型培养物保藏委员会淡水藻种库保藏编号为FACHB-7的淡水小球藻接种到灭菌后的BG11固体培养基中，恒温光照下培养得到活化后的小球藻，然后接种到灭菌后的BG11液体培养基中振荡培养，离心后取沉淀物用蒸馏水进行稀释，灭活后制成小球藻剂A；将CaCl₂·2H₂O和羧化壳聚糖溶解于蒸馏水中，搅拌得到辅剂B；将小球藻剂A加入辅剂B中，搅拌均匀，得到免疫蒸腾抑制剂。本发明方法比各类已有蒸腾抑制剂的制备更节水、环保、节约成本。

主权项

基于气孔感应小球藻闭合的免疫蒸腾抑制剂的制备方法，其特征在于该方法的具体步骤是：步骤(1).制备小球藻剂A，方法是：首先将淡水小球藻接种到灭菌后的BG11固体培养基中，置于25℃恒温光照培养箱中培养48h，得到活化后的小球藻；所述的淡水小球藻采用中国科学院典型培养物保藏委员会淡水藻种库中保藏编号为FACHB‑7的淡水小球藻；然后将活化后的小球藻接种到灭菌后的BG11液体培养基中，置于转速150～180ｒ/min的摇床上振荡培养，培养温度为20～25℃，培养时间为7～10个光照周期；一个光照周期为24小时，首先采用光强为2000～3000Lx的白色荧光灯光照14h，再置于黑暗中10h；将培养后的小球藻置于离心机中离心，取沉淀物干燥称重，用蒸馏水进行稀释，得到纯小球藻液，纯小球藻液中纯小球藻含量为10～20g/L；将纯小球藻液置于121℃、0.12～0.15Mpa压强下灭活60～80min，制成小球藻剂A；小球藻剂A于‑20℃下冻存；所述的BG11液体培养基配方及含量为：硝酸钠1.5g/L、磷酸氢二钾0.04g/L、硫酸镁0.075g/L、氯化钙0.036g/L、柠檬酸0.006g/L、柠檬酸铁铵0.006g/L、乙二胺四乙酸二钠0.001g/L、碳酸钠0.02g/L、硼酸0.00286g/L、氯化锰0.00186g/L、硫酸锌0.00022g/L、钼酸钠0.00039g/L、硫酸铜0.00008g/L、硝酸钴0.00005g/L，用蒸馏水配制，然后用1mol/L的NaOH或HCl调pH至7.1；所述的BG11固体培养基是在上述BG11液体培养基中按照每升15g添加琼脂得到；步骤(2).制备辅剂B，方法是：将CaCl₂·2H₂O和羧化壳聚糖溶解于蒸馏水中，搅拌均匀，得到辅剂B；辅剂B中CaCl₂·2H₂O的浓度为3g/L，羧化壳聚糖的浓度为0.01g/L；步骤(3).制备蒸腾抑制剂，方法是：将小球藻剂A加入辅剂B中，搅拌均匀，得到免疫蒸腾抑制剂；小球藻剂A与辅剂B的体积比为0.01～0.05：1。