主权项 |
一种柑橘全爪螨若螨的RNA干扰方法,其特征在于:按照如下步骤完成: (1)、柑橘全爪螨若螨的饲养 在培养皿内制成梯级滤纸隔离台,取洗净的柑橘叶片,将叶面向下置于滤纸隔离台上,用湿脱脂棉条压住叶沿,在叶片上接种橘全爪螨雌成螨,产卵24h后去除雌成螨,所述雌成螨产的卵置于恒温光照培养箱中,控制温度为25±1℃,相对湿度为70%‑80%,光周期为L:D=(14:10)h连续培养5‑7天,得到柑橘全爪螨若螨; (2)、对柑橘全爪螨若螨进行dsRNA溶液处理 将孵化的若螨挑在新的叶片上,在处理好的叶片上滴一滴dsRNA溶液,用0号毛笔将幼螨逐个轻轻挑于液滴上,浸5s后挑出,将浸过液的若螨置于恒温光照培养箱中控制温度为25±1℃,相对湿度为70%‑80%,光周期L:D=(14:10)h培养24h。所用dsRNA溶液为shRNA1溶液,其中shRNA1的碱基序列为: shRNA1:5′‑GATCGTCTGTTATTTCACC‑3′ SEQ NO1 shRNA1溶液浓度为2.0‑6.0μg/ml; (3)、测定处理后柑橘全爪螨若螨蜕皮及存活情况 记录喂食dsRNA溶液后的柑橘全爪螨若螨的蜕皮及存活情况,评价RNA干扰效果。 |