一种猪圆环病毒2型环介导等温扩增检测方法

摘要

本发明公开了一种猪圆环病毒2型环介导等温扩增（LAMP）检测方法，包括以下步骤：1）首先设计并合成特异性引物；2）从细胞提取病毒DNA模板；3）目的片段的获得：分别配制LAMP和PCR反应体系，按照LAMP和PCR反应程序进行反应得到目的片段；4）定性LAMP和PCR检测。本发明的检测方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、重复性好，并且检测的检测极限极低，灵敏度高，可准确定性检测出猪圆环病毒2型，达到预防和控制猪圆环病毒2型流行的作用。

主权项

一种猪圆环病毒2型环介导等温扩增检测方法，包括如下步骤：1）首先设计与合成六个特异性引物：正向内部引物FIP、反向内部引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3、正向环形引物LF和反向环形引物和LB，其核苷酸序列分别如SEQ ID No1‑SEQ ID No6所示，具体如下：FIP：5′‑CAGGAATACAATATCCGTGTAACCATTTTGGTTAAGTGGGGGGTCTT‑3′BIP：5′‑GAGGCCTACGTGGTCTACATTTTTCAAACAACAAAAGAAATCAGCTATG‑3′F3：5′‑CACTTCGTAATGGTTTTTATTATTTA‑3′B3：5′‑TCCACTATTGATTACTTCCAAC‑3′LF：5′‑AACCATGTATGTACAATTCAGAGAATTTAATC‑3′LB：5′‑TTTCCAGCAGTTTGTAGTCTCAGC‑3′2）从培养的细胞中提取病毒DNA模板；3）目的片段的获得：配制LAMP和PCR反应体系，按照LAMP和PCR反应程序进行扩增反应得到目的片段；4）定性LAMP检测和定性PCR检测：将上述LAMP和PCR扩增产物分别进行琼脂糖凝胶电泳分析，扩增出与PCV2相应的约200bp大小的特异片段即为阳性，没有扩增出该特异性片段即为阴性。