主权项 |
1.一种体外准确检测KRAS基因突变的方法,该检测方法应用于非疾病诊断目的,包括以下步骤:(1)等位基因特异性引物的设计及合成针对KRAS基因第二号外显子典型的7种突变分别设计等位基因特异性引物,作为上游引物;序列信息如下:<img file="FDA0000416082890000011.GIF" wi="1489" he="675" />针对KRAS基因第二号外显子典型的7种突变设计共同的下游引物为延伸阻滞引物;序列信息如下延伸阻滞引物(38nt):<img file="FDA0000416082890000012.GIF" wi="1506" he="167" />(2)模板的准备提取被测样本的KRAS基因组DNA;另制取野生型基因组DNA;(3)实时荧光PCR针对步骤(1)中的7种特异性引物,建立被测样本、野生型模板的反应体系;被测样本的每个反应体系中均加入被测样本的KRAS基因组DNA、特异性引物和延伸阻滞引物;野生型模板的每个反应体系中均加入野生型基因组DNA、特异性引物和延伸阻滞引物;将配制好的各反应体系在荧光实时定量PCR仪上进行扩增,观察比较特异性引物对应的被测样本、野生型模板的反应体系的扩增曲线,判断被测样本中是否发生了KRAS突变。 |