一种红桦组织培养育苗方法

摘要

本发明公开了一种红桦组织培养快速育苗方法，由无菌培养物的建立、芽苗的诱导、丛生芽的增殖、芽苗生根培养以及组培苗的移栽5个技术环节构成。利用本方法进行红桦组织培养快速育苗具有芽诱导率高、增殖系数大、生根率高和移栽成活率高的优点，一般芽诱导率可以达到75％以上，月增殖系数到达4，生根率80％以上，移栽成活率大于85％，可以为林业生产中红桦的大规模栽培提供一种繁殖速度快、生产周期短、遗传稳定性好的育苗方法，扩大红桦种源生产，解决生产中对红桦种苗的需求。

主权项

一种红桦组织培养育苗方法，其包括如下步骤：(1)无菌培养物的建立选取当年生新发红桦嫩梢，剪去叶片和叶柄，切割成1.0～1.5cm长带有顶芽和腋芽的节段，将带芽节段置于自来水下冲洗2～3h，然后用洗衣粉液浸泡10～30min，用软刷刷洗节段后再置流水下冲洗30min；在超净工作台上，用60‑80％乙醇浸泡15～30s，无菌水冲洗2～4次，然后用0.05～0.15％的氯化汞处理6～8min，用无菌水冲洗4～6次，用滤纸吸干带芽节段获得无菌培养物；(2)芽苗的诱导将上述步骤获得的无菌带芽节段接种到芽苗诱导培养基上促进腋芽的萌发和生长，芽苗诱导培养基为MS、1／2MS、1／4MS基本培养基中的任意一种或者两种的组合，加入0.5～1.5mg／L的BA，0.1～0.5mg／L的IBA，以及20～40g／L的蔗糖和5～8g／L的琼脂，用HCl和／或NaOH调节芽苗诱导培养基pH为5.8～6.0；(3)芽苗的增殖待培养物出现点状芽后，把上述步骤获得的培养物转移到芽苗增殖培养基进行芽苗的继代扩繁增殖，芽苗增殖培养基为1／2MS基本培养基，加入0.5～2.0mg／L的BA，0.2～0.8mg／L的IBA，以及20～40g／L的蔗糖和5～8g／L的琼脂，用HCl和／或NaOH调节芽苗增殖培养基pH为5.8～6.0；重复上述继代扩繁增殖步骤以获得足够的芽苗；(4)芽苗生根培养选取步骤(3)中增殖的2～3cm长的芽苗转移到生根培养基中生根以获得完整的植株，生根培养基为MS、1／2MS、1／4MS基本培养基，附加0.6～1.0mg／L的IBA，0.1～0.3mg／L的NAA，以及10～30g／L的蔗糖和5～8g／L的琼脂，用HCl和／或NaOH调节培养基pH为5.8～6.0；(5)炼苗与移栽移栽前，把步骤(4)获得的生根芽苗在培养架上炼苗1～2周，逐渐降低培养容器湿度，并适当增加光照，以促进茎叶保护组织的发生和气孔功能的恢复；炼苗后取出生根组培苗，洗净根上滞留的琼脂培养基，用杀菌剂护根处理后移入营养土中培养，控制环境湿度80～90％，稍后逐渐降低环境湿度，待有新芽发出后按常规苗圃育苗措施管理。