一种在大肠杆菌中一步法合成DNA片段并组装合成基因的方法

摘要

本发明提出了一种在大肠杆菌中一步法合成DNA片段并组装合成基因的方法，主要步骤包括：构建LIC载体质粒LIC-A；制备LIC-A线性载体；构建组装DNA片段的受体载体puc-Kana；选择目标基因，划分300bp左右的小片段进行合成；多个小片段DNA利用金门克隆反应组装成大片段基因。本发明操作简单，无需再重复做克隆和测序的操作，直接退火，克隆效率高，使用了发光报告基因sfgfp、gfp，筛选方法直观，合成方法的错误率很低，合成基因的周期短，大大节约了成本，节约了时间。本发明适用于各种基因的合成，对于大基因的合成特别有效。

主权项

一种在大肠杆菌中一步法合成DNA片段并组装合成基因的方法，其特征在于主要步骤包括：构建LIC载体质粒LIC‑A；LIC‑A线性载体的制备；构建组装DNA片段的受体载体puc‑Kana；选择目标基因，划分300bp左右的小片段进行合成；多个小片段DNA用金门克隆反应组装成大片段基因。