一种试管内脱除烟草花叶病毒和无毒苗的快速繁殖方法

摘要

本发明涉及一种试管内脱除烟草花叶病毒和无毒苗的快速繁殖方法。其步骤如下：（1）将烤烟型烟草品种的种子播于苗盘中，待种子萌发得处理后茎尖作为外植体备用。（2）茎尖接种至附加吲哚乙酸0.02～0.05mg·L^-1和赤霉素1.50～1.70mg·L^-1，食用白糖10g·L^-1，琼脂条8.5g·L^-1的基本培养基中进行脱除烟草花叶病毒培养；（3）培养温度控制在52～54℃，培养48～54d后，实现烟草花叶病毒脱除。（4）当茎尖生长至1.0cm时，即可切割0.05cm的茎尖进一步开展无毒苗培养，可直接应用于无花叶病毒烟草种苗的工厂化生产。腋芽萌发生长及茎段基部生根培养，成苗率可达99.3%。无毒苗成活率达95.0%以上。

主权项

一种试管内脱除烟草花叶病毒和无毒苗的快速繁殖方法，其特征在于步骤如下：（1）将烤烟型烟草品种的种子播于苗盘中，待种子萌发且苗长至3～5 cm时，得处理后茎尖作为外植体备用；所述的处理是指将2 cm的茎尖剪下并去除叶片和叶柄，在超净台上用70%酒精涮洗10 s，用饱和次氯酸钠溶液浸泡5 min，无菌水冲洗8次，用无菌滤纸吸干表面水分，切除被杀菌消毒剂损伤部分后切取0.05～0.20 cm的茎尖；（2）茎尖接种至附加吲哚乙酸0.02～0.05 mg·L^‑1和赤霉素1.50～1.70 mg·L^‑1，食用白糖10 g·L^‑1，琼脂条8.5 g·L^‑1的基本培养基中进行脱除烟草花叶病毒培养；基本培养基成份及使用用量：174 mg·L^‑1(NH₄)₂SO₄，360 mg·L^‑1KNO₃，122.5 mg·L^‑1MgSO₄·7H₂O，218 mg·L^‑1KH₂PO₄；18.4 mg·L^‑1FeSO₄·7H₂O，24.9 mg·L^‑1Na₂·EDTA·2H₂O；12.4 mg·L^‑1MnSO₄·4H₂O，7.2 mg·L^‑1ZnSO₄·7H₂O，0.32 mg·L^‑1KI；（3）培养温度控制在52～54 ℃，培养48～54 d后，实现烟草花叶病毒脱除；（4）当茎尖生长至1.0 cm时，即可切割0.05 cm的茎尖进一步开展无毒苗培养。